ВведениеАнтарктический криль Euphausia superba –пелагический циркумполярный вид ракообразныхиз семейства эвфаузиид (Euphausiidae), которыйвстречается в антарктических и субантарктичес-ких водах Южного океана. Благодаря широкойраспространенности, уникальному химическомусоставу и пищевой ценности его считают важнымпромысловым объектом и называют «розовымзолотом» [1, 2].В 1970–1980 гг. промысел криля велся судамиСССР и Японии, но в последние годы лидерами подобычи криля являются Норвегия, Корея и Китай [3].В России утверждена Стратегия развития деятельности451Лазарева О. И. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2022. Т. 52. № 3. С. 449–457Российской Федерации в Антарктике до 2030 г., вкоторой ресурсам криля уделено большое значение [4].Рыбная промышленность широко используетАнтарктический криль в качестве сырья дляпроизводства разного рода продукции [1]. Егоперерабатывают на кормовую белковую пастуи протеиновую муку для аквакультуры, чащелосося [3, 5]. В индустрии питания популярнытакие продукты переработки криля, как крилеваяпаста, мясо, консервы и масло. Фармацевтическаяпромышленность выпускает биологически активныевещества и лечебные препараты [1]. Для зарубежныхученых приоритетным направлением являетсяполучение белковых и жировых фракций, а такжеэмульсии для пищевых целей [ 6–8].Несмотря на преимущества данного про-мыслового ресурса, в научной литературе встре-чаются неоднозначные данные в отношениипоказателей безопасности. Наибольшее количествоисследований посвящено определению показателейтоксичности. Установлено высокое содержаниефтора в панцире, поэтому публикации последнихлет посвящены разработке методик дефторированияантарктического криля и продукции из него [9–11].Обнаружена способность антарктического крилябиоаккумулировать токсичные техногенныезагрязнители: хлорорганические пестициды, стойкиеорганические загрязнители, броморганическиесоединения, а также высокие концентрации ртутии метилртути [12–15]. Данные химические веществанакапливаются в морских экосистемах и липидахгепатопанкреаса [12]. Небезопасен антарктическийкриль в отношении стероидных экзогенных гормонов,особенно глюкокортикостероидов. Негативныепоследствия представляют опасность для организмови их последующих потребителей в пищевой цепи [16].Криль является одним из основных под-держивающих факторов пищевой цепи Антарктикидля морских млекопитающих, птиц и многих видоврыб, в том числе микробных сообществ [17–19].Популяция криля представляет собой большоеколичество биомассы, которая может служитьрезервуарным или промежуточным хозяиномразличных паразитических организмов. В отношенииизучения паразитических организмов антарктическогокриля имеются лишь единичные сведения [ 3, 18].Микробиологический профиль криля исследованс помощью молекулярно-генетических методов.Исследования санитарно-показательных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмоввыполнены более двадцати лет назад.Показатели безопасности нормируютсядействующими регламентами ТР ТС 021/2011,ТР ЕАЭС 040/2016 и СанПиН 2.3.2.1078-01. Ониопределяют нормативные значения токсикологи-ческих, микробиологических и радиологическихпоказателей. Относительно паразитологическихпоказателей для морских ракообразных данныеотсутствуют.Цель исследования – анализ образцов антарк-тического криля E. superba на наличие паразитическихорганизмов и микроорганизмов, представляющихопасность для человека и животных.Объекты и методы исследованияОбъектом исследования являлись свеже-замороженные рачки Euphausia superba (n = 130)разного пола и размера (рис. 1). Пробы былипредоставлены специалистом сектора биоресурсовАнтарктики ФГБНУ «ВНИРО». Образцы былиполучены в ходе выполнения комплексныхисследований состояния запасов антарктическогокриля и океанологических условий в подрайонахАнтарктической части Антарктики в 69-м рейсе СТМ«Атлантида» в январе 2020 г. в море Скотия к северуот Южных Оркнейских островов в координатах58°58' ю.ш. 45°37' з.д. – траловая станция № 39.Определение общей длины тела криля, пола,стадий половой зрелости, цвета, наличия и отсутствиячерно-пятнистой болезни ракообразных выполнялисьв соответствии с общепринятыми методиками ирекомендациями АНТКОМ. Для паразитологическогоисследования ракообразных на наличие личинокпаразитов тщательно просматривались органы,полости тела и ткани (МУК 3.2.988-000). Затеммышечные ткани криля исследовали методомкомпрессионной микроскопии. Для обнаруженияпаразитических простейших готовили мазки-отпечатки тканей тела рачков, которые фиксировалиэтиловым спиртом и окрашивали по Романов-скому, а затем микроскопировали при увеличении×100, ×400, ×1000. Подготовку проб замороженныхрачков к микробиологическому анализу выполнялипо ГОСТ 26669. Культивирование микроорганиз-мов проводили по ГОСТ 26670. Растворы,реактивы, краски, индикаторы и питательные средыдля анализа приготавливали по ГОСТ ISO 7218и ГОСТ ISO 11133. Определяли следующиемикробиологические показатели на соответствиепараметрам ТР ТС 021/2011, ТР ЕАЭС 040/2016,Рисунок 1. Рачки антарктического криля Euphausiasuperba после размораживанияFigure 1. Euphausia superba after defrosting452Lazareva O.I. et al. Food Processing: Techniques and Technology. 2022;52(3):449–457СанПиН 2.3.2.1078-01: количество мезофильныхаэробных и факультативно-анаэробных микро-организмов по ГОСТ 10444.15, осуществляя термо-статирование посевов при 25 и 37 °С; бактериигруппы кишечной палочки (колиформы) – поГОСТ 31747; Staphylococcus aureus – по ГОСТ 31746;патогенные микроорганизмы рода сальмонелла –по ГОСТ 31659 (ISO 6579). Параллельно пробыисследовали на наличие и количество дрожжейи плесневых грибов по ГОСТ 10444.12. Длявыполнения гистологического исследования телорачков разрезали на сегменты в области головогрудии брюшка размером 10 мм и помещали в раствор4 %-ного нейтрального формалина. Гистологическиепрепараты готовили по стандартной методике споследующим окрашиванием гематоксилин-эозиномв лаборатории гистопатологии Пермской краевойдетской клинической больницы. Микроскопированиеготовых микропрепаратов выполняли на кафедреинфекционных болезней факультета ветеринарноймедицины и зоотехнии Пермского ГАТУ намикроскопе Meiji (Япония) при увеличении ×100.Результаты фиксировали с помощью фотокамерыVision (Канада).Результаты и их обсуждениеИз представленных 130 образцов криляпрактически все рачки были без механическихповреждений, окраска печени – зелено-коричневая.Размеры варьировались от 38 до 57 мм. В пробебыли представлены самки посленерестовой стадиизрелости IIIE и зрелые самцы стадии IIIB. При осмотрецефалоторакса и плеопод на наличие эпибионтоввнешних проявлений не обнаружено.При просмотре с помощью компрессорияпрепаратов мышц абдомена включений и возбудителейAnisakis spp. в пробах не зафиксировано (рис. 2).При микроскопии окрашенных мазков-отпечатковтела рачков паразитических простейших не выявлено(рис. 3).Сообщения о паразитических организмах вEuphausia superba редки. Для антарктического криляхарактерно наличие нескольких типов специфическихпатогенов: эпибионты, патогенные микроорганизмы,паразиты, паразитойды и предположительно вирусы.Последние данные сообщают об инфузорияхэпибионтах и гистофагах, хитинолитическихбактериях и грибах, а также эндопаразитах,представленных апикомплексами и нематодами,поражающими икру [3, 20]. Существуют паразиты,которые могут представлять потенциальную опасностьдля человека и животных. Из паразитических нематодэвфаузиид патогенными для человека могут бытьпредставители семейства Anisakidae. В литературенет сообщений о заражении этими гельминтамиE. superba. Однако известно, что они встречаютсясреди эвфаузиид умеренной и субтропической зони арктической экосистемы. J. Gomez-Gutierrez иJ. R. Morales-Avila сообщают, что исследованиеобразцов антарктических криля (35 и 92 тыс.) иморских млекопитающих на наличие Anisakis spp.не дало положительных результатов [21].У мигрирующих глубоководных костистых рыби китов, которые питаются антарктическим крилем,обнаруживают Аnisakis simplex и Аnisakis pegreffii.Это объясняется заражением нематодами в пределахсеверных широт, точнее, за границами Атлантики [21].Есть предположение, что на паразитарнуюзараженность криля влияют характеристики стаии поведение отдельных особей. Плотность стаиопределяет паразитарную нагрузку: чем ниже ееплотность, тем ниже паразитарное воздействие.Некоторым паразитам для завершения жизненныхциклов требуются стаи с высокой численностью,компактным роением и стайным (эмерджентным)поведением. Размер и продолжительность жизнирачков также имеют немаловажное значение. Молодыеособи более подвержены инфекциям и инвазиям.Однако существует гипотеза, согласно которойнизкие температуры неблагоприятны для развитияпаразитов и патогенов [22]. J. Gomez-Gutierrez и J. R.Morales-Avila считают, что пониженное разнообразиепаразитов у E. superba связано с их антарктическойзоогеографической структурой, куда паразитыРисунок 2. Мышцы абдомена (ув. ×100)Figure 2. Abdominal muscles (mag. ×100)Рисунок 3. Мазок-отпечаток тела Euphausia superba(окраска по Романовскому; ув. ×1000)Figure 3. Stroke-imprint of the body of Euphausia superba(Romanovsky stain; mag. ×1000)453Лазарева О. И. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2022. Т. 52. № 3. С. 449–457еще не вторглись эволюционно по сравнению сдругими видами членистоногих из экосистем другихширот [21].В действующих отечественных регламентах ТР ТС021/2011, ТР ЕАЭС 040/2016 и СанПиН 2.3.2.1078-01паразитологические показатели для морскихракообразных, в частности криля, отсутствуют. Онипредставлены только для пресноводных креветокводоемов Дальнего Востока, в которых не допускаетсяналичие личинок парагонимусов в живом виде.При микробиологическом исследовании замо-роженного криля были получены результаты,представленные в таблице 1. Значение КМАФАнМзамороженного криля при 37 и 25 °С составило менее1,0×103 КОЕ/г. Полученные данные согласуютсяс исследованиями, полученными ВНИРО, такжепредставленными в таблице 1 [23]. Согласно этимданным микрофлора свежевыловленного криля,а именно мезофильных бактерий, не превышала1,6×103 кл/г при 37 и 25 °С, а психрофилов,культивируемых при температуре ниже +10 °С,составила 4,0×104 кл/г. Микробная обсемененностьморской воды, выполненная методом мембранныхфильтров, не превышала 4,2×103 в 1 мл. Еслисравнивать полученный показатель с действующиминормативными документами, то представленная пробасоответствует нормативному значению, несмотряна длительное хранение.Посев разведений образца на среды дляопределения условно-патогенных бактерийгруппы кишечной палочки не дал результата.Аналогичные данные при определении этойгруппы бактерий получены ВНИРО как вотношении свежевыловленного криля, так иморской воды. При культивировании на средахдля определения патогенных микроорганизмов,в т. ч. сальмонелл, регистрировали отсутствие роста.В свежевыловленном криле санитарно-показательныеи условно-патогенные микроорганизмы обнаруженыне были [23].При определении санитарно-показательныхмикроорганизмов, таких как стафилококки и стреп-тококки, в объеме пробы 0,1 г отмечали рост нажелточно-солевом агаре с образованием гладкихкруглых колоний белого цвета, определяемыепо морфологии как грамположительные кокки(рис. 4). Генетическая идентификация выделенныхмикроорганизмов не проводилась. Результатыподтверждаются ранее проведенными (ВНИРО)исследованиями, в которых морфологически вы-деляли кокки и короткие палочки из психрофилови мезофилов.Согласно проведенным ранее исследованиямсотрудниками ВНИРО при пересевах бактерий,выросших при 37 °С, отмечено угнетение их ростаТаблица 1. Результаты микробиологических исследований замороженного антарктического криляTable 1. Microbiological studies of frozen Antarctic krillПоказатели ВНИРО [23] Фактический результат ТР ТС 021/2011ТР ЕАЭС 040/2016*СанПиН 2.3.2.1078-01**Количество мезофильных аэробныхи факультативно-анаэробныхмикроорганизмов при 37 и 25 °С,KOE/г, не болееНе более 1,6×103 Менее 1,0×103 Не более 5×104 ; 1,0×105*;1×103**Бактерий группы кишечной палочки(колиформы), гНе обнаружено Не обнаружено в 1,0–0,00001 г Не допускаются в 0,001 гПатогенные микроорганизмы,в том числе рода сальмонелла, гНе обнаружено Не обнаружено в 25 г Не допускаются в 25 гListeria monocytogenes, г Не обнаружено Не определяли Не допускаются в 25 гStaphylococcus aureus, г ОбнаруженыMicrococcusОбнаружены коккив 0,1 гНе допускаются 0,01 гПлесневые грибы, KOE/г 0,4×102–3,2×102 3,0×102 Не нормируетсяДрожжи, KOE/г 0,2×102–1,3×102 Не обнаружено Не нормируетсяVibrio parahaemolyticus, KOE/г Не обнаружено Не определяли Не более 100Рисунок 4. Кокки. Препарат чистой культуры изколонии выросшей на желточно-солевом агаре через48 ч при 37 °С (окраска по Граму; ув. ×100)Figure 4. Cocci. Pure culture from a colony grown on yolkand salt agar after 48 h at 37°C (Gram stain; mag. ×100)454Lazareva O.I. et al. Food Processing: Techniques and Technology. 2022;52(3):449–457на обычных питательных средах и последующаягибель. По предположению ученых, это говорито более низких температурах для их культиви-рования [23].Невысокую обсемененность криля исследователисвязывали с низкой температурой и низкойзагрязненностью морских вод в районе промысла.Эти выводы подтверждают результаты современныхисследований. Оптимальная температура длявыделения бактерий, актинобактерий и грибов крилясоставляет 16, 16 и 28 °C соответственно. Из 25бактериальных изолятов 92 % были выделены при16 °C, оставшиеся при 4 °C. Это Streptomyces sp. иAdvenella sp. [24].При исследовании видового состава микрофлорыметодом поверхностного посева различныхразведений на разные питательные среды преобладалипигментообразующие формы бактерий, неспоровыепсихрофилы и мезофилы [23]. Нами они не выявлены.Обнаружено, что среди микрофлоры свеже-выловленного криля присутствуют бактерииантагонисты окружающей микрофлоры. Отмечено,что чистые культуры выделенных бактерий хорошоросли на питательных средах с содержанием 12–14 %натрия хлорида. При идентификации былиопределены следующие роды бактерий: Micrococcus,Pseudomonas и Bacillus [23].Микробиота криля E. superba изучена спомощью молекулярно-генетических исследований.Установлено, что на количественный составмикрофлоры ракообразных влияют окружающая среда,время года, связанное с откормом, наполненностьжелудочно-кишечного тракта криля, сами ткании органы, простейшие эпибионты – инфузории.Бактериальные сообщества формируютсяв зависимости от географического региона.Бактерии криля отличаются от бактерий морскойводы [18]. При изучении бактерии эпибионтовустановлено, что каждая стая криля под-держивает свой индивидуальный микробиом [19].Установлено, что наибольшие качественныеразличия наблюдаются среди бактерий, связанныхс экзоскелетом. Преобладающими бактериямиэпибионтами является класс Gammaproteobacteriaтипа протеобактерий, меньше – класс Bacteroidiaтипа Bacteroidetes, еще меньше – классAlphaproteobacteria. Из протеобактерий в образцахлиньки преобладает род Colwellia, в пищеварительнойсистеме – род Pelomonas [18]. Доминантнымикультивируемыми бактериями пищеварительноготракта рачков являются Pseudomonas, Actinobacteria,Flavobacteria, а также Micrococcus, Vibrio, Bacillus,Corynebacterium и Clostridium. При этом бактериирода Pseudoalteromonas, Psychrobacter, Staphylococcusи Vibrio потенциально являются условно-патоген-ными [3]. Дополнительно у криля выделены родыPlanococcus, Advenella и Streptomyces [23].Установлено, что микробную порчу E. superba прихранении и транспортировке вызывают доминирующиепротеобактерии рода Psychrobacter [25]. Y. Wangи L. Ma обнаружили и идентифицировали новыйштамм бактерий рода Planococcus P. alpniumensisиз Антарктиктического криля [26].На среде Сабуро обнаружены однотипныебархатистые колонии серовато-зеленых с белойпериферической частью микроскопических грибоврода Penicillium (рис. 5) в количестве 3,0×102. Ихвидовую идентификацию не проводили. По дан-ным [23] количество плесеней (клеток/грамм) в крилеиз Атлантического сектора составило 0,4×102–3,2×102,дрожжей – 0,2×102–1,3×102. Penicillium вызывает порчупищевых продуктов и является менее токсигеннымгрибом по сравнению с родами Aspergillus и Fusarium.Для выявления наличия токсинообразованияразработаны генетические методы, но они неадаптированы для пищевой микологии [ 27].Результаты проведенного микологическогоисследования согласуются с более раннимирезультатами [23, 24]. При генетическом изучениимикрофлоры E. superba идентифицировано42 вида гриба, принадлежащих к типуAscomycota, включающие пять родов (Penicillium,Cladosporium, Aspergillus, Talaromyces иMeyerozyma). Доминирующей группой из микро-скопических грибов был род Penicillium [24].При исследовании поверхностного горизонтаморской воды в большинстве проб определеныплесени рода Penicillium. Обнаружены дрожжи,относящиеся к отделу Basidiomycota родовRhodotorula и Sporobolomyce. В отношениидрожжей E. superba в литературе имеется малоданных. Ранее психрофильные дрожжи выделялив небольшом количестве из кишечника [3]. Попоследним сообщениям у E. superba обнаруженынеклассифицированные Saccharomycetes [25].Результаты исследований последних лет сообщаюто недостаточной изученности иммунного ответау эвфаузиид. Не изучена противомикробная иРисунок 5. Микроскопические грибы рода Penicilliumвыросшие через 5 суток инкубации при 24 °С (ув. ×4)Figure 5. Microscopic Penicillium fungi after 5 days of incubationat 24°C (mag. ×4)455Лазарева О. И. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2022. Т. 52. № 3. С. 449–457противогрибковая активности, образование свободныхрадикалов и реакция на окислительный стресс. Этоприводит к плохому пониманию влияния эпибионтов,патогенов, паразитов и паразитойдов не толькона эвфаузиид, но и на хищников зоопланктона инектона криля. P. J. Seear и др. при генетическомисследовании экспресии иммунных генов эвфа-узиид выделили иммунные протеазы и белки:катепсины и лектины С-типа, гемоцианин, которыеобладают антибактериальной и противогрибковой,противовирусной и регенерирующей актив-ностями [22].X. Cui и др. изучали бактерии и грибы, выделенныеот E. superba, на антибактериальную активностьпротив распространенных водных патогенныхбактерий, опасных для морской флоры, фауны илюдей: Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrioparahemolyticus, Vibrio harveyi, Edwardsiellatarda и Bacillus cereus, а также пяти патогенныхмикроорганизмов для человека: Staphylococcus aureus,Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Bacillussubtilis и Pseudomonas aeruginosa. Исследованияпоказали, что метаболиты бактерий Psychrobacterи Bacillus проявляли большую антимикробнуюактивность против водных патогенных бактерий [24].Среди грибов активность в отношении тех жеорганизмов проявил Penicillium sp. У Penicilliumcitrinum, полученного от криля, определено семьсоединений, обладающих антипролиферативнымдействием в отношении культур опухолевыхклеток. S.-Y. Zhang и др. выделили пятнадцатьантиоксидантных пептидов из белков антарктическогокриля, производство которых перспективно дляприменения в продуктах питания и продуктах дляздоровья. Ученые предположили, что микробиотаE. superba при помощи антимикробных и цито-токсических метаболитов защищает своего хозяина отусловно-патогенных и патогенных микроорганизмовиз-за их антагонистических отношений [28].При микроскопии гистологических препаратовиз сегментов тела рачков головогруди и брюшкаотмечали характерный рисунок строения тканей.Внимание уделяли мышечной ткани, которая имеетосновное значение для получения продуктов питания.Гистологическое исследование показало в ней вотдельных полях зрения присутствие дезорганизациимышечных волокон и наличие отека междуотдельными волокнами и соединительнотканнойпрослойкой без признаков воспалительнойреакции. Это стало следствием замораживания ипоследующего оттаивания материала (рис. 6). Прибольшем увеличении объектива в миоцитах отмечаливакуолизацию ядер из-за воздействия кристалловльда. Паразитических организмов среди тканевыхструктур образца не обнаружено.S. Miwa и др. выполняли гистологическоеисследование черных пятен головогруди антарк-тического криля. Гистологические исследованияпоказали, что они представлены меланизированнымиузелками, состоящими из гемоцитов, окружающихбактерии или аморфный материал. При генетическихисследованиях пятен были выделены Psychrobacterили Pseudoalteromonas. В некоторых пробах измеланизированных участков были выделены такженеидентифицированные паразиты, окруженныегетероморфными клетками. Ученые объясняютэтиологию данных пятен наличием паразитарнойинфекции, которая после миграции паразитовосложнилась бактериальной. В предоставленныхобразцах криля черные пятна отсутствовали [28].Среди специфических паразитических простейшихантарктического криля встречаются эпибионты иэндопаразиты. Инфузории-эпибионты поражаютголовогрудь, брюшко и придатки (щетинки плеоподгрудных конечностей). К эндопаразитам кишечникаи гепатопанкреаса, передаваемым трофически,относятся грегарины и цефалоидофориды [3]. А. С.Cleary и др. проводили генетическое исследованиесодержимого кишечника (рациона) криля на наличиепаразитов [20]. Среди шести таксономических разныхгрупп превалировали инфузории Pseudocollinia spp.,нематоды, характерные для пингвинов, Stegophorusmacronectes и апикомплексы кишечника. Так как этотема недостаточно изучена, то считается, что не всеперечисленные паразитические организмы характерныдля E. superba – часть из них является случайнымиобъектами рациона. Для исключения неправильныхрезультатов и выводов рекомендуется передпроведением исследований предварительно выдержатькриль в фильтрованной морской воде несколькочасов и совмещать молекулярную диагностикус микроскопией, которая дает дополнительнуюдостоверную информацию [18]. Полученныеотрицательные результаты объясняются тем, чтогрегарины, локализующиеся в пищеварительнойсистеме E. superba, регистрируются при помощимолекулярной диагностики [3, 30].Исследованный антарктический криль свободенот паразитов и безопасен в микробиологическомРисунок 6. Мышечные волокна криля(окраска гематоксилином-эозином; ув. ×40)Figure 6. Muscle fibers of krill (hematoxylin-eosin stain;mag. ×40)456Lazareva O.I. et al. Food Processing: Techniques and Technology. 2022;52(3):449–457отношении. Поэтому он может быть использовандля пищевого производства и других целей, но приконтроле на исключение V. parahemolyticus.ВыводыВ результате паразитарного и компрессорногоисследования 130 образцов криля-сырца, добытогов море Скотия, не обнаружено паразитов, пред-ставляющих опасность для человека.При изучении микробного фона замороженногокриля КМАФАнМ составило менее 1,0×103.Анализ качественного состава нормируемых поНД микроорганизмов позволил выявить кокки,культивируемые при 37 °С.Фунгифлора представлена однотипными коло-ниями рода Penicillium (3,0×102 КОЕ/г). Определениепоказателя представляло интерес, но регламентамион не нормируется.При гистологическом исследовании сегментовголовогруди и абдомена патологических измененийтканей и паразитических организмов не обнаружено.Критерии авторстваО. И. Лазарева – проведение исследований, анализэкспериментальных данных и выводы. А. М. Сытов –сбор и первичная обработка материалов.Конфликт интересовАвторы заявляют об отсутствии конфликтаинтересов.БлагодарностиВыражаем благодарность старшему научномусотруднику ФГБНУ «ВНИРО» А. В. Согриной заоказание сотрудничества в проведении исследований,а также научной группе, в частности Д. А. Козлову,и экипажу СТМ «Атлантида» за помощь в сборе иобработке материалов в ходе 69-й экспедиции.ContributionO.I. Lazareva performed the research, analyzed theexperimental data, and draw conclusions. A.M. Sytovcollected and processed the research materials.Conflict of interestThe authors declare that there is no conflict of interestregarding the publication of this article.AcknowledgementsWe would like to express our gratitude toA.V. Sogrina, senior researcher at the Russian FederalResearch Institute of Fisheries and Oceanography, aswell as to D.A. Kozlov, the research team, and thecrew of RV Atlantida for their help in collecting andprocessing materials during Expedition 69.