<!DOCTYPE article
PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.4 20190208//EN"
       "JATS-journalpublishing1.dtd">
<article xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" article-type="research-article" dtd-version="1.4" xml:lang="en">
 <front>
  <journal-meta>
   <journal-id journal-id-type="publisher-id">Food Processing: Techniques and Technology</journal-id>
   <journal-title-group>
    <journal-title xml:lang="en">Food Processing: Techniques and Technology</journal-title>
    <trans-title-group xml:lang="ru">
     <trans-title>Техника и технология пищевых производств</trans-title>
    </trans-title-group>
   </journal-title-group>
   <issn publication-format="print">2074-9414</issn>
   <issn publication-format="online">2313-1748</issn>
  </journal-meta>
  <article-meta>
   <article-id pub-id-type="publisher-id">41470</article-id>
   <article-id pub-id-type="doi">10.21603/2074-9414-2020-4-763-773</article-id>
   <article-categories>
    <subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="ru">
     <subject>ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ</subject>
    </subj-group>
    <subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="en">
     <subject>ORIGINAL ARTICLE</subject>
    </subj-group>
    <subj-group>
     <subject>ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ</subject>
    </subj-group>
   </article-categories>
   <title-group>
    <article-title xml:lang="en">Psychrophilic Microorganisms in Natural Sources of the Kemerovo Region: Isolation and Antimicrobial Properties</article-title>
    <trans-title-group xml:lang="ru">
     <trans-title>Выделение психрофильных микроорганизмов из природных источников Кемеровской области и изучение их антимикробных свойств</trans-title>
    </trans-title-group>
   </title-group>
   <contrib-group content-type="authors">
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-7333-8411</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Дышлюк</surname>
       <given-names>Любовь Сергеевна</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Dyshlyuk</surname>
       <given-names>Lyubov S.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-1"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-4921-8997</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Бабич</surname>
       <given-names>Ольга Олеговна</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Babich</surname>
       <given-names>Olga O.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <email>OOBabich@kantiana.ru</email>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>доктор технических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>doctor of technical sciences;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-2"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Остроумов</surname>
       <given-names>Лев Александрович</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Ostroumov</surname>
       <given-names>Lev A.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-3"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Ван</surname>
       <given-names>Сяоцзе </given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Wang</surname>
       <given-names>Xiaojie </given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-4"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-1198-1951</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Носкова</surname>
       <given-names>Светлана Юрьевна</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Noskova</surname>
       <given-names>Svetlana Yu.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <email>SNoskova@kantiana.ru</email>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>кандидат технических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>candidate of technical sciences;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-5"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0001-7910-8388</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Сухих</surname>
       <given-names>Станислав Алексеевич</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Sukhikh</surname>
       <given-names>Stanislav A.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <email>SSukhikh@kantiana.ru</email>
     <bio xml:lang="ru">
      <p>кандидат технических наук;</p>
     </bio>
     <bio xml:lang="en">
      <p>candidate of technical sciences;</p>
     </bio>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-6"/>
    </contrib>
   </contrib-group>
   <aff-alternatives id="aff-1">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Балтийский фед еральный университет имени Иммануила Канта</institution>
     <city>Калининград</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">Immanuel Kant Baltic Federal University</institution>
     <city>Kaliningrad</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-2">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»</institution>
     <city>Калининград</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">Immanuel Kant Baltic Federal University</institution>
     <city>Kaliningrad</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-3">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»</institution>
     <city>Калининград</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">Immanuel Kant Baltic Federal University</institution>
     <city>Kaliningrad</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-4">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Цицикарский университет</institution>
     <city>Цицикар</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">Qiqihar University</institution>
     <city>Qiqihar</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-5">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">ФГАОУ ВО «Балтийский  федеральный  университет имени Иммануила Канта»</institution>
     <city>Калининград</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">Immanuel Kant Baltic Federal University</institution>
     <city>Kaliningrad</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-6">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">ФГАОУ ВО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта»</institution>
     <city>Калининград</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">Immanuel Kant Baltic Federal University</institution>
     <city>Kaliningrad</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <volume>50</volume>
   <issue>4</issue>
   <fpage>763</fpage>
   <lpage>773</lpage>
   <self-uri xlink:href="http://fptt.ru/eng/?page=archive&amp;jrn=59&amp;article=17">http://fptt.ru/eng/?page=archive&amp;jrn=59&amp;article=17</self-uri>
   <abstract xml:lang="ru">
    <p>Введение. В настоящее время экстремальные психрофилы мало изучены. Однако они представляют интерес для создания биопрепаратов для производства лекарств и повышения сроков хранения пищевых продуктов. Проблема исследования свойств психрофильных микроорганизмов является актуальной. Целью работы является выделение в экстремальных условиях низких температур пещер Горной Шории и Салаира (Кемеровская область) новых психрофильных микроорганизмов и изучение их антимикробных свойств.&#13;
Объекты и методы исследования. Психрофильные микроорганизмы, выделенные в пещерах Кемеровской области. Образцы помещали в стерильную крафтовую бумагу. Устойчивость к антибиотикам определялась областью, в которой диск с антибиотиком подавлял рост изолята. Для этого выделенную суспензию клеток инокулировали сплошным газоном в чашке Петри со средой на основе агара, а диски с антибиотиками помещали на поверхность среды. Инкубировали в термостате при 28 °C в течение 24 ч.&#13;
Результаты и их обсуждение. Из микробных сообществ пещер Гавриловская и Азасская выделено 7 изолятов, различных по морфологическим признакам. Установлено, что изоляты 1, 4 и 5 обладают выраженными супрессивными свойствами по отношению ко всем тест-культурам патогенов при температуре 2 ± 4 °С. Изоляты 1, 4 и 5 устойчивы к различным антибиотикам. Изолят 1 проявляет высокую устойчивость (21–26) к антибиотикам неомицину и новограмону. Среднюю устойчивость (17–22) – к цепарину, канамицину, левомицитину, карбенициллину и стрептомицину. Низкую устойчивость (2–8) – к антибиотикам бензилпенициллину и клотримазолу. Изолят 1 не проявляет антибиотикоустойчивость к ампициллину, гентамицину и тетрациклину. Изолят 4 проявляет высокую устойчивость (22–27) к новограмону. Среднюю устойчивость (10–22) – к тетрациклину, клотримазолу, неомицину, цепарину, канамицину, левомицитину и мономицину. Низкую устойчивость (2–8) – к антибиотикам ампициллину, бензилпенициллину, стрептомицину и гентамицину. Изолят 4 не проявляет антибиотикоустойчивость к карбенициллину и полимиксину. Изолят 5 высоко устойчив (27–26) к антибиотикам цепарину, бензилпенициллину, левомицитину и новограмону. Средне устойчив (12–22) к клотримазолу, стрептомицину, неомицину, гентамицину, полимиксину, карбенициллину и мономицину. Изолят 5 не устойчив к ампициллину, тетрациклину и канамицину.&#13;
Выводы. Психрофилы могут выступать в роли микроорганизмов, на основе которых будет создаваться новые биопрепараты, подавляющие развитие заболеваний у растений. Использование психрофилов в процессе выращивания и хранения продукции сельского хозяйства является перспективным и актуальным научным направлением.</p>
   </abstract>
   <trans-abstract xml:lang="en">
    <p>Introduction. Extreme psychrophiles still remain largely understudied. However, they can serve as biological components in drug production, as well as increase the shelf life of food products in food industry. Therefore, the properties of psychrophilic microorganisms are a relevant study object. The present research objective was to isolate new psychrophilic microorganisms in extreme low-temperature conditions of the caves of Gornaya Shoria and Salair (Kemerovo region) and study their antimicrobial properties.&#13;
Study objects and methods. The research featured psychrophilic microorganisms isolated in the caves of the Kemerovo region. The sampling was performed in triplicate. The samples were placed in sterile paper. Antibiotic resistance was defined according to the area where the antibiotic plate suppressed bacterial growth. The cell suspension was placed in a Petri dish with an agar-based medium. The discs with antibiotics were put on the surface of the medium and incubated in a thermostat at 28°C for 24 h in order to describe the growth of the isolates.&#13;
Results and discussion. The microbial communities of the Gavrilovskaya and Azasskaya caves produced seven isolates with different morphological characteristics. Isolates 1, 4, and 5 had pronounced suppressive properties at 2 ± 4°C. Isolates 1, 4, and 5 proved resistant to antibiotics. Isolate 1 exhibited high resistance (21–26) to Neomycin and Novogramon, medium resistance (17–22) to Ceparin, Kanamycin, Levomycin, Carbenicillin, and Streptomycin, and low (2–8) resistance to Benzylpenicillin and Clotrimazole. Isolate 1 had no antibiotic resistance to Ampicillin, Gentamicin, and Tetracycline. Isolate 4 showed high resistance (22–27) to Novogramon, medium resistance (10–22) to Tetracycline, Clotrimazole, Neomycin, Zeparin, Kanamycin, Levomycin, and Monomycin, and low resistance (2–8) to Ampicillin, Benzylpenicillin, Streptomycin, and Gentamicin. Isolate 4 demonstrated no antibiotic resistance to Carbenicillin and Polymyxin. Isolate 5 proved highly resistant (27–26) to Ceparin, Benzylpenicillin, Levomycetin, and Novogramon, and medium resistant (12–22) to Clotrimazole, Streptomycin, Neomycin, Gentamicin, Polymyxin, Carbenicillin, and Monomycin. Isolate 5 demonstrated no resistance to Ampicillin, Tetracycline, and Kanamycin.&#13;
Conclusion. Psychrophiles can serve as microorganisms to create new biological products that suppress the development of diseases in plants. Psychrophiles proved an extremely promising research direction for cultivating and storing agricultural products.</p>
   </trans-abstract>
   <kwd-group xml:lang="ru">
    <kwd>Психрофильные микроорганизмы</kwd>
    <kwd>изоляты</kwd>
    <kwd>бактериоцины</kwd>
    <kwd>антимикробные свойства</kwd>
   </kwd-group>
   <kwd-group xml:lang="en">
    <kwd>Psychrophilic microorganisms</kwd>
    <kwd>isolates</kwd>
    <kwd>bacteriocins</kwd>
    <kwd>antimicrobial properties</kwd>
   </kwd-group>
   <funding-group>
    <funding-statement xml:lang="ru">Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) (№ 20-34-70004\19 от 21.11.2019 г).</funding-statement>
    <funding-statement xml:lang="en">The research was supported by the Russian Foundation for Basic Research (RFBR) (No. 20-34-70004\19 dated November 21, 2019).</funding-statement>
   </funding-group>
  </article-meta>
 </front>
 <body>
  <p>На сегодняшний день из-за постоянныхвыбросов в атмосферу загрязняющих веществнаблюдается резкое повышение допустимыхконцентраций вредных соединений. Появлениеновых видов болезней и паразитов влияет нато, что производители сельскохозяйственнойпродукции вынуждены применять новые средствазащиты, которые негативно сказываются набезопасности почвы и водоемов. Все это приводитк тому, что с каждым годом появляется все большепрепаратов, где химические соединения заменяютсямикроорганизмами. Однако такие биопрепаратыне всегда оказываются эффективными, поэтомупоиск и выделение новых штаммов с высокойантагонистической активностью является актуальнойзадачей.Использование бактерий с антагонистическойактивностью является в процессе выращиванияи хранения продукции сельского хозяйстваперспективным и актуальным научным направле-нием. С целью предотвращения порчи продукции впроцессе хранения от деятельности нежелательноймикрофлоры сегодня используют химическиепрепараты, облучение, обработка газом илиозоном. Однако данные способы, хоть и являютсяэффективными, имеют свои недостатки [1].Из-за постоянного применения химическихреагентов у патогенов растет устойчивость к ихвоздействию, при этом ежегодно появляются новыевспышки заболеваний. Это приводит к повышениювносимых доз препаратов, что способствуютразвитию устойчивости патогенов.В пищевом производстве безопасные консервантыассоциируются с молочнокислыми бактериями иих метаболитами (бактериоцинами), безопасностькоторых уже не требует доказательства [2, 3].Бактериоцинподобные вещества вырабатываюти другие микроорганизмы. Например, бактериигруппы Bacillus spp., в сочетании с лактобактериями,позволяют расширить спектр антимикробнойактивности с сохранением относительной безопасности. Но и в этом случае не удается достичьполной защиты продуктов от действия патогенныхбактерий [4].В условиях пониженных температур решитьэту проблему с сохранением безопасности могутпсихрофильные микроорганизмы. Это не толькобактерии, но грибы и дрожжи, оказывающиеантагонистический эффект на те микроорганизмы,которые остаются нечувствительными кбактериоцинам молочнокислых бактерий.Психрофильные бактерии – это бактерии, которыеспособны выживать при низких температурах(от –10 °С). Также психрофилы функционируютпри температурах выше 20 °С [5]. На их основеможно создавать новые биопрепараты, подавляющиеразвитие заболеваний у растений даже при невысокихтемпературах [6].Развитие психрофильных микроорганизмовна поверхности пищевых продуктов можетспособствовать их порче даже при низкихтемпературах. Похожая ситуация может возникнутьс патогенными бактериями, некоторые из которыхобладают способностью расти на холоде [7].В природе психрофильные микроорганизмымогут встречаться как в виде прокариот, так иэукариот. К психрофилам относятся некоторыенасекомые, грибы, определенные группы бактерий.В широком смысле, психрофилы – это организмы, непрекращающие свое размножение в условиях низкихтемператур [8, 9].Психрофильные микроорганизмы целе-направленно воздействуют на возбудителейзаболеваний, не наносят экологического вредаи сохраняют все полезные свойства продукции.Помимо предотвращения развития патогенноймикрофлоры, при взаимодействии с продуктоммикроорганизмы активируют защитные процессысамого продукта. За счет этого у него вырабатываетсясобственный иммунитет к фитопатогенам [10].Пещеры на протяжении тысячи лет занимаюттерритории земного ландшафта. Это часть неживойприроды с особенным ландшафтом, в недрах которыхможно найти специфические и встречающиеся толькотам живые организмы. Фауна пещеры подразделяетсяна два вида: троглофилы – организмы, помимопещеры, живущие на наземной части; троглобионты– организмы, обитающие в пещере постоянно.Большое количество представителей троглобионтовобусловлено поддерживанием постоянныхклиматических условий в пещере [11].К сожалению, пещерам, как и другимсоставляющим земного ландшафта, наноситсянепоправимый вред от деятельности человека. Любоестороннее воздействие на пещеры приводит к ееразрушению без возможности восстановления [12].Если рассматривать микробную флору пещеры,то ее представителями можно считать грибыи бактерии, которые находятся на различныхэтапах приспособления к условиям с пониженнойтемпературой. Так как пещера – ограниченноепространство, то это приводит к тому, чтомикроорганизмы находятся в постоянной борьбе заисточники питательной среды. Также микробнымпредставителям пещер необходимо конкурироватьс представителями микрофлоры почвы, которыепоступают в пещеру с верхних слоев и ужеадаптированы к росту при установившихся условияхсреды. Такая борьба привела к тому, что в пещереможно встретить штаммы микроорганизмовс антимикробной активностью, направленнойна подавление роста представителей наземныхбактерий. Данные микроорганизмы можно применятьдля защиты растений от нежелательной микрофлорыи болезней даже при условиях низких температур,где известные биопрепараты не будет приноситьдолжного эффекта [4, 13].После изучения пещерной микробиотыСибирского региона обнаружено наличие в них трехпредставителей микроорганизмов:– облигатно психрофильные микроорганизмы(морские светящиеся бактерии, Bacillus psychrophilus,железобактерии). Для данных представителейоптимальной температурой для роста и развитияявляется диапазон между +15–20 °С. Притемпературе, выходящей за установленные рамки,микроорганизмы теряют способность к дальнейшемуразвитию и погибают. Облигатно психрофильныемикроорганизмы относятся к постоянным обитателямпещер и хорошо адаптированы к сибирскимусловиям;– факультативные микроорганизмы (бактерии родаArthrobacter, Pseudomonas). Представители данногомикробного сообщества имеют оптимальнуютемпературу роста +30 °С. При этом не теряют такуюспособность при температуре +4 °С. Они относятся кмикроорганизмам, которые попадают в пещеры извне.Возможность расти при невысоких температурахпозволяет им полностью адаптироваться к пещернойсреде и образовать свою микробиоту [12, 13];– психротолерантные изоляты, которые вклю-чают в себя температурный диапазон роста,находящийся в промежуточных пределах междуоблигатно психрофильными и мезофильнымимикроорганизмами. Психротолерантные изолятыможно рассматривать как переходную форму междупсихрофилами и мезофилами, которые отличаютсядруг от друга выживаемостью в определенныхтемпературных условиях [4, 14, 15].Главной отличительной особенность изолятовявляется способность запасаться липоидами.Например, известен штамм психрофила DL-3.2,выделенный из ледяной пещеры, может накапливатьдо 60 % жиров. Схожие свойства обнаружены и уизолятов, выделенных из других пещер [5].Психрофильные микроорганизмы отличаютсяот мезофильных высокой скоростью роста припониженных температурах (ниже +10 °С). В своюочередь, факультативные психрофилы размножаютсяболее низкими темпами, чем облигатные. Наиболеезаметны различия в росте психрофильных имезофильных бактерий в диапазоне температур от 0до +10 °С. У мезофилов такие температурные условиязамедляют обмен веществ, что приводит к остановкеделения клетки [16, 17].Известны также экстремальные психрофильныемикроорганизмы. Они растут в специальныхрасщелинах, образующихся между водой и льдом,при температуре –10 °С [18].Было установлено, что почвенные психрофилы,по сравнению с морскими, имеют широкийтемпературый предел, позволяющий им расти вэкстремальных условиях [2, 19].Реакцией на воздействие низких температурявляется выделение белков холодного шока (CSPбелков). Изначально, белки синтезируются внебольшом количестве, но в дальнейшем, существуяв условиях низких температур, их концентрациязначительно увеличивается. CSP белки достаточноактивны и способны уменьшать скорость протеканияреакции. Для психрофилов источником сохраненияэнергии выступают ферменты, которые ускоряютреакционные процессы. При последующемпонижении температуры в клетках бактерийначинают появляться кусочки льда, что приводит к ихгибели. Когда в клетке начинает образовываться лед,то вокруг нее собирается большое количество соли.За счет этого увеличивается осмотическое давлениеклетки и она приспосабливается к осмотическомушоку. Все это приводит к образованию в клеткеосморегуляторных веществ, которые предотвращаютклеточные компоненты от разрушения. Известныбактерии (Pseudomonas syringae) с центромкристаллизации льда, находящимся в мембранныхбелках, контролирующие появление частичекльда. Структура образующегося таким образомльда упорядочена и клетка в меньшей степениподвергается разрушению [5, 16, 19].Психрофилы не образуют единой илинесколько филогенетических групп. Извыделенных и охарактеризованных психротрофныхмикроорганизмов со схожими свойствамибольшинство относятся к бактериям. Бактериитакже достаточно разнообразны: грамотрицательныеи грамположительные бактерии, кокки,спорообразующие бактерии и др. [5, 13].Классификация пещерной микрофлорыСибирского региона достаточно объемна. Грибы,найденные в данной среде, подразделяются на15 родов, которые относятся к 5 отделам: Fusarium,Mortierella, Doratomyces, р.р. Pythium, Cryptococcus,Echinobotryum, Paecilomyces, Mucor, Penicillium,Thamnidium, Trichoderma, Chrysosporium, Periconia,Verticillium.Среди обитающих в пещерах психрофильных ипсихротолерантных бактерий идентифицированыпредставители коринебактерий, а также родArthrobacter, Bacillus, Sporosarcina, Pseudomonas,Paenibacillus, Pseudochrobactrum. Температура,при которой микроорганизмы не теряютспособности размножению, может составлять от +23до +30 °С [9, 16].Исследования микробиоты пещер и регионов скритическими условиями среды ведутся довольнодавно. Уже были достигнуты определенныерезультаты в данной области. Но данные офункциональном состоянии и генетическомразнообразии пока не структурированы и требуютвсестороннего изучения. Психрофилы, хоть иявляются перспективным средством для развитияэкономики и экологии, не являются хорошоизученными. Это говорит о необходимостипроведения новых исследований по данномунаправлению [8, 12].Целью работы является выделение вэкстремальных условиях низких температур пещерГорной Шории и Салаира (Кемеровская область)новых психрофильных микроорганизмов и изучениеих антимикробных свойств.Научная новизна работы заключается в том,что новые психрофильные микроорганизмы быливпервые выделены в экстремальных условиях пещерГорной Шории и Салаира и проведены исследованияпо изучению их антимикробных свойств.Объекты и методы исследованияВ качестве объектов исследования использовалисьпсихрофильные микроорганизмы, выделенные впещерах Горной Шории и Салаира (Кемеровскаяобласть).При выполнении исследований использовалиантибиотики: новограмон, стрептомицин, поли-миксин, карбенициллин, канамицин, неомицин,цепарин, клотримазол, ампициллин, мономицин,левомицитин, тетрациклин, бензилпенициллин игентамицин.Микроорганизмы штаммов: Candida lambica,Streptococcus sp., Enterobacter sp., Micrococcus sp.,Staphilococcus sp., Esherihia sp. и Salmonella sp.При выполнении исследований использовалиследующее оборудование: автоклав «DGM-80»(«DGM», Швейцария), аналитические весы«AND HR-202i» (A&amp;D, Япония), ламинарный бокскласс 2/тип А («ламинарные системы», Россия);бидистиллятор «ТХ 25-11.15.92-81 БС.W39»(ОАО «Химлабприбор», Россия).Пробы отбирали трехкратно, в шахматномпорядке, на определенной глубине. Образцыпомещали в стерильную крафтовую бумагу. Для767Дышлюк Л. С. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2020. Т. 50. № 4 С. 763–773выделения штаммов использовали метод, описанныйв «Методах микробиологического контроля почвы.Методические рекомендации» (утв. Главнымгосударственным санитарным врачом РФ 24.12.2004№ ФЦ/4022), а также Практикумом по биологии почвпод редакцией Г. М. Зеновой.Бактериальные культуры микроорганизмоввыращивали на твердой питательной средеследующего состава в течение 48 часов:– GRM агар, г/л: кислый гидролизат рыбноймуки – 20,0; глюкоза – 10,0; агар – 5,0;– мясопептонный агар (МПА), г/л: пептон сухойТаблица 1. Морфология изолятов, выделенных из пещер Горной Шории и СалаираTable 1. Morphology of isolates from the Gornaya Shoria and Salair cavesИзолят Морфология колоний Микроскопические характеристикиИзолят 1 Колонии диаметром 1–3 мм, цвет колоний светло-желтый со слабо выраженной пигментацией.Колонии круглые, края колоний ровные и плоские,колонии прозрачныеГрамотрицательные палочки 0,5 ± 0,7×1,0 ± 2,5 мкм.При исследовании методом «висячая капля» клеткиподвижныИзолят 2 Мелкоморщинистые, округлые, средних размеров(3–5 мм), профиль волнистый, матовые, цветбелый, край волнистый, структура однородная,консистенция плотнаяДрожжеподобные грибки. Клетки крупные, овальные,размером 3,6–7,2 микрона в длину и 3–4,5 микрона вдиаметре. При исследовании методом «висячая капля»клетки подвижныИзолят 3 Округлые, размер 6–9 мм, профиль выпуклый,ворсинистые, цвет от белого до буро-зеленого, крайнеровный, структура неоднородная, консистенцияплотнаяАктивно развитый мицелий. Споро иконидиеобразующие. ГрамположительныеИзолят 4 Серовато-белые колонии с гладкими краями, слегкаврастающими в агар, вязкой консистенции. Размерколоний 1–3 ммГрамположительные аэробные спорообразующиепалочки размером 2–3×0,6 мкм, расположенныеодиночно, попарно или цепочкой. При исследованииметодом «висячая капля» клетки подвижныИзолят 5 Колонии в центральной части повышенные,бороздчатые, серовато-белые, бледно-розовые,от серовато-зеленых до орехово-зеленыхДрожжеподобные грибки. Мицелий светлый,пушистый. Конидиогенез слабый, серо-зеленоватогооттенкаИзолят 6 Мелкоморщинистые, округлые, больших размеров(3–7 мм), профиль волнистый, матовые, цвет отбелого до кремового, край неровный, структураоднородная, консистенция плотнаяКокки, диплококки, цепочки или скопления из кокков,иногда встречаются палочки. Грамположительные,спорообразующие. Неподвижные. Размер 1–5 мкмИзолят 7 Серовато-белые колонии с гладкими краями, слегкаврастающими в агар, вязкой консистенции. Размер1–3 ммГрамположительные аэробные спорообразующиепалочки размером 2–3×0,6 мкм, расположенныеодиночно, попарно. При исследовании методом«висячая капля» клетки подвижныРисунок 1. Расположение пещеры «Гавриловская»в Кемеровской областиFigure 1. Gavrilovskaya cave in the Kemerovo regionРисунок 2. Расположение пещеры «Азасская»в Кемеровской областиFigure 2. Azasskaya cave in the Kemerovo region768Dyshlyuk L.S. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2020, vol. 50, no. 4, pp. 763–773ферментативный – 10,0; экстракт мясной – 11,0;NaCl – 5,0; агар-агар – 15,0, глюкоза – 10,0; водадистиллированная.Для идентификации выделенных микроорга-низмов использовали бактериальные детерминантыБерги и метод, предложенный в монографииО. А. Нестеренко с соавторами. Мазок окрашивалипо ГрамуИзоляты микроорганизмов получали следующимобразом: для выделения ДНК из анализируемыхобразцов использовался метод экстракции фенолом/хлороформом и очистки раствором CTAB (цетил-триметил аммонийбромид). Морфологический составизолятов представлен в таблице 1.Использовали стандартные методы микро-биологии, Enterotest, Nefermtest, API 50 CH идополнительные каталоги/программы идентификациидля биохимического тестирования, а такжебактериологический полуавтоматический анализатор(«Autoscan», США) для идентификации изолятов.Для оценки супрессивной активности изолятовиспользовали тест-штаммы возбудителей болезнейчеловека, животных и растений. Штаммы родовMicrococcus, Staphilococcus, Streptococcus, Salmonella,Esherihia, Candida и Acinetobacter.Все штаммы-патогены получены из коллекцииФГБУ «Государственный научно-исследовательскийинститут генетики и селекции промышленныхмикроорганизмов Национального исследовательскогоцентра «Курчатовский институт» (ГосНИИГенетика)»и Бактериологической лаборатории при МУЗ ЦРБ Гу-рьевского района.Чтобы идентифицировать активные изолятыпсихротрофных бактерий, изоляты наносили начашки Петри. Параллельно готовили суспензииантагонистических штаммов и патогенныхбактерий плотностью не более 108 КОЕ/мл. ДляРисунок 4. Места отбора проб в пещере «Азасская»Figure 4. Sampling locations in Azasskaya caveТаблица 2. Исследование психрофильных и супрессивных свойств изолятов, полученныхиз пещер Горной Шории и СалаираTable 2. Psychrophilic and suppressive properties of isolates obtained from the caves of Gornaya Shoria and SalairНомеризолятаВид микроорганизмаCandidalambicaStreptococcussp.Enterobactersp.Micrococcussp.Staphilococcussp.Esherihiasp.Salmonellasp.1 2 3 4 5 6 7Изолят 1 +++ ++ + + ++++ + ++Изолят 2 – + + – – – –Изолят 3 – + – – – ++ –Изолят 4 +++ + ++++ ++ + ++ +Изолят 5 – – ++ ++ ++ + –Изолят 6 – + + – – – –Изолят 7 – + + – – + –«–» – отсутствие зон; + наличие зоны угнетения роста патогена в месте соприкосновения с бактериальным штрихом; ++ обширная зонаугнетения роста патогена в месте соприкосновения с бактериальным штрихом и в сопредельной области; +++ наличие зоны лизиса междуштаммами; ++++ наличие обширной зоны лизиса между штаммами.“–” – no zones; + a zone of inhibition where pathogen comes in touch with the bacterial streak; ++ an extensive zone of inhibition where pathogencomes in touch with the bacterial streak and in the adjacent area; +++ a lysis zone between strains; ++++ an extensive lysis zone between strains.Рисунок 3. Места отбора проб в пещере «Гавриловская»Figure 3. Sampling locations in Gavrilovskaya cave769Дышлюк Л. С. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2020. Т. 50. № 4 С. 763–773получения желаемых клеток бактериальный газонпромывали 0,9 % раствором NaCl. Суспензиюфитопатогенных грибов готовили промываниеммицелия и массы спор с грибных газонов накартофельном агаре с декстрозой (КНА). В чашкуПетри с GRM, мясопептонным агаром (MPA) и КНАинокулировали штаммы-антагонисты по диаметрулинии. Инокулировали суспензию бактериальной игрибковой культур перпендикулярно линии. ЧашкиПетри хранили в холодильнике при 4 °C. Наличие зонподавления роста патогенов оценивали через 8 дней.Устойчивость к антибиотикам определяласьобластью, в которой диск с антибиотиком подавлялрост изолята. Для этого выделенную суспензиюклеток инокулировали сплошным газоном вчашке Петри со средой на основе агара, а диски сантибиотиками помещали на поверхность среды.Инкубировали в термостате при 28 °C в течение 24 ч.Описывали рост изолятов.Рисунок 5. Колонии изолятов на ГРМ-агаре через 24 чкультивированияFigure 5. Colonies of isolates on agar after 24 hof cultivation(а) (b)(c) (d)Таблица 3. Результаты изученияантибиотикоустойчивости изолята 1Table 3. Isolate 1: antibiotic resistanceАнтибиотик Содержание микроорганизмовв 1 см3 культуры штамма1×106 1×107 1×108Зоны ингибирования ростаизолятов, ммАмпициллин 0 0 0Стрептомицин 12 14 17Гентамицин 0 0 0Карбенициллин 19 21 20Полимиксин 0 0 0Левомицитин 21 21 19Клотримазол 6 8 6Цепарин 20 19 17Тетрациклин 0 0 0Мономицин 3 2 2Неомицин 26 26 24Новограмон 25 23 26Канамицин 22 19 17Бензилпенициллин 2 3 2Рисунок 6. Ингибирование зон роста изолята 1:1 – цепарин; 2 – ампициллин; 3 – полимиксин;4 – гентамицин; 5 – канамицин; 6 – тетрациклин;7 – неомицин; 8 – левомицитин; 9 – карбенициллин;10 – стрептомицин; 11 – клотримазол;12 – бензилпенициллин;13 – мономицин; 14 – новограмонFigure 6. Inhibition of growth zones of isolate 1:1 – Ceparin;2 – Ampicillin; 3 – Polymyxin; 4 – Gentamicin; 5 – Kanamycin;6 – Tetracycline; 7 – Neomycin; 8 – Levomycetin; 9 – Carbenicillin;10 – Streptomycin; 11 – Clotrimazole; 12 – Benzylpenicillin;13 – Monomycin; 14 – NovogramРисунок 7. Ингибирование зон роста изолята 4:1 – полимиксин; 2 – ампициллин; 3 – тетрациклин;4 – гентамицин; 5 – клотримазол; 6 – карбенициллин;7 – новограмон; 8 – мономицин; 9 – стрептомицин;10 – бензилпенициллин; 11 – неомицин;12 – цепарин; 13 – канамицин; 14 – левомицитинFigure 7. Inhibition of growth zones of isolate 4: 1 – Polymyxin;2 – Ampicillin; 3 – Tetracycline; 4 – Gentamicin; 5 – Clotrimazole;6 – Carbenicillin; 7 – Novogram; 8 – Monomycin; 9 – Streptomycin;10 – Benzylpenicillin; 11 – Neomycin; 12 – Zeparin;13 – Kanamycin; 14 – Levomycetin770Dyshlyuk L.S. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2020, vol. 50, no. 4, pp. 763–773Таблица 4. Результаты изученияантибиотикоустойчивости изолята 4Table 4. Isolate 4: antibiotic resistanceАнтибиотик Содержание микроорганизмовв 1 см3 культуры штамма1×106 1×107 1×108Зоны ингибирования ростаизолятов, ммНовограмон 22 27 25Стрептомицин 1 1 2Полимиксин 0 0 0Карбенициллин 0 0 0Канамицин 13 17 16Неомицин 13 12 11Цепарин 18 20 22Клотримазол 10 11 12Ампициллин 1 2 6Мономицин 11 12 10Левомицитин 20 18 18Тетрациклин 13 13 14Бензилпенициллин 8 6 8Гентамицин 1 1 2Таблица 5. Результаты изученияантибиотикоустойчивости изолята 5Table 5. Isolate 5: antibiotic resistanceАнтибиотик Содержание бактерийв 1 см3 культуры штамма1×106 1×107 1×108Зоны ингибирования роста, ммКанамицин 0 0 0Бензилпенициллин 26 23 27Цепарин 24 22 27Полимиксин 12 17 15Тетрациклин 0 0 0Стрептомицин 21 20 22Клотримазол 21 21 22Левомицитин 27 22 22Гентамицин 14 17 12Ампициллин 0 0 0Неомицин 13 17 16Мономицин 12 17 12Карбенициллин 22 20 22Новограмон 23 26 27Рисунок 8. Ингибирование зон роста изолята 5:1 – цепарин; 2 – гентамицин; 3 – полимиксин;4 – карбенициллин; 5 – мономицин; 6 – новограмон;7 – бензилпенициллин; 8 – клотримазол; 9 – тетрациклин;10 – стрептомицин; 11 – канамицин; 12 – неомицин;13 – ампициллин; 14 – левомицитинFigure 8. Inhibition of growth zones of isolate 5: 1 – Ceparin;2 – Gentamicin; 3 – Polymyxin; 4 – Carbenicillin; 5 – Monomycin;6 – Novogram; 7 – Benzylpenicillin; 8 – Clotrimazole;9 – Tetracycline; 10 - Streptomycin; 11 – Kanamycin;12 – Neomycin; 13 – Ampicillin; 14 – LevomycetinРезультаты и их обсуждениеВ результате проведенных исследованийиз микробных сообществ пещер Гавриловская(Кемеровская область, Беловский район, рис. 1, 3)и Азасская (Кемеровская область, Таштагольскийрайон, п. Усть-Кабырза, рис. 2 и 4) выделено 7изолятов, различных по морфологическим признакам.Для выделенных изолятов исследовалисупрессивные и психрофильные свойства.Полученные результаты представлены в таблице 2.На основании анализа данных, представленныхв таблице 1, установлено, что изоляты 1, 4 и 5обладают выраженными супрессивными свойствамипо отношению ко всем изученным тест-культурампатогенов при температуре 2 ± 4 °С. Дальнейшиеисследования свойств изолятов целесообразнопроводить с номерами 1, 4 и 5 (рис. 5).Результаты изучения антибиотикорезистентностивыделенных изолятов представлены в таблицах 3–5 ина рисунках 6–8.Полученные результаты свидетельствуют отом, что изолят 1 проявляет высокую устойчивость(21–26) к антибиотикам неомицину и новограмону.Среднюю устойчивость (17–22) – к цепарину,канамицину, левомицитину, карбенициллину истрептомицину. Низкую устойчивость (2–8) – кбензилпенициллину и клотримазолу. Изолят 1 непроявляет антибиотикоустойчивость к ампициллину,гентамицину и тетрациклину.Изолят 4 проявляет высокую устойчивость(22–27) к новограмону. Среднюю устойчивость(10–22) к антибиотикам тетрациклину, клотримазолу,неомицину, цепарину, канамицину, левомицитинуи мономицину. Низкую устойчивость (2–8) кантибиотикам ампициллину, бензилпенициллину,стрептомицину и гентамицину. Изолят 4 не проявляетантибиотикоустойчивость к карбенициллину иполимиксину.Изолят 5 высоко устойчив (27–26) кантибиотикам цепарину, бензилпенициллину,левомицитину и новограмону. Средне устойчив(12–22) к клотримазолу, стрептомицину, неомицину,гентамицину, полимиксину, карбенициллину имономицину. Изолят 5 не устойчив к ампициллину,тетрациклину и канамицину.771Дышлюк Л. С. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2020. Т. 50. № 4 С. 763–773ВыводыИз микробных сообществ пещер Гавриловская(Кемеровская область, Беловский район) и Азасская(Кемеровская область, Таштагольский район,п. Усть-Кабырза) выделено 7 изолятов, различныхпо морфологическим признакам. Установлено, чтонаиболее выраженными супрессивными свойствамипо отношению к тест-культурам патогенов(Candida lambica, Streptococcus sp., Enterobactersp., Micrococcus sp., Staphilococcus sp., Esherihiasp., Salmonella sp.) обладают изоляты 1, 4 и 5.Установлены пределы антибиотикоустойчивостиизолятов психрофильных микроорганизмов.Критерии авторстваФактический вклад каждого автора:Л. С. Дышлюк – 25 %, О. О. Бабич – 25 %,Л. А. Остроумов – 15 %, Сяоцзе Ван – 5 %,С. Ю. Носкова – 5 %, С. А. Сухих – 25 %.Конфликт интересовАвторы заявляют об отсутствии конфликтаинтересовContributionEach of the authors is responsible for the followingpart of research: L.S. Dyshlyuk – 25%, O.O. Babich– 25%, L.А. Ostroumov – 15%, Xiaojie Wang – 5%,S.Yu. Noskova – 5%, S.A. Sukhikh – 25%.Conflict of interestThe authors declare that there is no conflict ofinterests regarding the publication of this article.</p>
 </body>
 <back>
  <ref-list>
   <ref id="B1">
    <label>1.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Study of biocompatibility and antitumor activity of lactic acid bacteria isolated from the human gastrointestinal tract / A. Yu. Prosekov, L. S. Dyshlyuk, I. S. Milentieva [et al.] // International Journal of Pharmacy and Technology. - 2016. - Vol. 8, № 2. - P. 13647-13661.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Prosekov AYu, Dyshlyuk LS, Milentieva IS, Sukhikh SA, Babich OO, Ivanova SA, et al. Study of biocompatibility and antitumor activity of lactic acid bacteria isolated from the human gastrointestinal tract. International Journal of Pharmacy and Technology. 2016;8(2):13647-13661.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B2">
    <label>2.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Proteorhodopsin light-enhanced growth linked to vitamin-B1 acquisition in marine Flavobacteria / L. Gómez-Consarnau, J. M. González, T. Riedel [et al.] // The ISME Journal. - 2016. - Vol. 10. - P. 1102-1112. https://doi.org/10.1038/ismej.2015.196.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Gómez-Consarnau L, González JM, Riedel T, Jaenicke S, Wagner-Döbler I, Sañudo-Wilhelmy SA, et al. Proteorhodopsin light-enhanced growth linked to vitamin-B1 acquisition in marine Flavobacteria. The ISME Journal. 2016;10:1102-1112. https://doi.org/10.1038/ismej.2015.196.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B3">
    <label>3.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Воробьева, С. В. Влияние температуры на рост психрофильных бактерий, выделенных из пещер дальнего востока, средней Сибири и западного Кавказа / С. В. Воробьева, С. В. Хижняк, Л. Т. Харламова // Вестник КрасГАУ. - 2012. - Т. 72, № 9. - С. 117-121.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Vorobyeva SV, Hizhnyak SV, Kharlamova LT. Influence of temperature on growth of psychrophilic bacteria isolated from the caves of Far East, Middle Siberia and Western Caucasus. Bulletin of KSAU. 2012;72(9):117-121. (In Russ.).</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B4">
    <label>4.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Introducing EzBioCloud: A taxonomically united database of 16S rRNA gene sequences and whole-genome assemblies / S.-H. Yoon, S.-M. Ha, S. Kwon [et al.] // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. - 2017. - Vol. 67, № 5. - P. 1613-1617. https://doi.org/10.1099/ijsem.0.001755.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Yoon S-H, Ha S-M, Kwon S, Lim J, Kim Y, Seo H, et al. Introducing EzBioCloud: A taxonomically united database of 16S rRNA gene sequences and whole-genome assemblies. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 2017;67(5):1613-1617. https://doi.org/10.1099/ijsem.0.001755.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B5">
    <label>5.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Flavobacterium collinsense sp. nov., isolated from a till sample of an Antarctic glacier / Y. Zhang, F. Jiang, X. Chang [et al.] // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. - 2016. - Vol. 66, № 1. - P. 172-177. https://doi.org/10.1099/ijsem.0.000688.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Zhang Y, Jiang F, Chang X, Qiu X, Ren L, Qu Z, et al. Flavobacterium collinsense sp. nov., isolated from a till sample of an Antarctic glacier. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 2016;66(1):172-177. https://doi.org/10.1099/ijsem.0.000688.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B6">
    <label>6.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Antioxidant and antimicrobial activity of bacteriocin-producing strains of lactic acid bacteria isolated from the human gastrointestinal tract / A. Yu. Prosekov, L. S. Dyshlyuk, I. S. Milentieva [et al.] // Progress in Nutrition. - 2017. - Vol. 19, № 1. - P. 67-80. https://doi.org/10.23751/pn.v19i1.5147.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Prosekov AYu, Dyshlyuk LS, Milentieva IS, Sukhikh SA, Babich OO, Ivanova SA, et al. Antioxidant and antimicrobial activity of bacteriocin-producing strains of lactic acid bacteria isolated from the human gastrointestinal tract. Progress in Nutrition. 2017;19(1):67-80. https://doi.org/10.23751/pn.v19i1.5147.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B7">
    <label>7.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Vinuesa, P. GET_PHYLOMARKERS, a software package to select optimal orthologous clusters for phylogenomics and inferring pan-genome phylogenies, used for a critical geno-taxonomic revision of the genus Stenotrophomonas / P. Vinuesa, L. E. Ochoa-Sánchez, B. Contreras-Moreira // Frontiers in Microbiology. - 2018. - Vol. 9. https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.00771.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Vinuesa P, Ochoa-Sánchez LE, Contreras-Moreira B. GET_PHYLOMARKERS, a software package to select optimal orthologous clusters for phylogenomics and inferring pan-genome phylogenies, used for a critical geno-taxonomic revision of the genus Stenotrophomonas. Frontiers in Microbiology. 2018;9. https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.00771.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B8">
    <label>8.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Biogeography of cryoconite bacterial communities on glaciers of the Tibetan Plateau / Y. Liu, T. J. Vick-Majors, J. C. Priscu [et al.] // FEMS Microbiology Ecology. - 2017. - Vol. 93, № 6. https://doi.org/10.1093/femsec/fix072.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Liu Y, Vick-Majors TJ, Priscu JC, Yao T, Kang S, Liu K, et al. Biogeography of cryoconite bacterial communities on glaciers of the Tibetan Plateau. FEMS Microbiology Ecology. 2017;93(6). https://doi.org/10.1093/femsec/fix072.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B9">
    <label>9.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Versatile genome assembly evaluation with QUAST-LG / A. Mikheenko, A. Prjibelski, V. Saveliev [et al.] // Bioinformatics. - 2018. - Vol. 34, № 13. - P. i142-i150. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/bty266.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Mikheenko A, Prjibelski A, Saveliev V, Antipov D, Gurevich A. Versatile genome assembly evaluation with QUAST-LG. Bioinformatics. 2018;34(13):i142-i150. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/bty266.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B10">
    <label>10.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Structural basis of glycogen biosynthesis regulation in bacteria / J. O. Cifuente, N. Comino, J. Madariaga-Marcos [et al.] // Structure. - 2016. - Vol. 24, № 9. - P. 1613-1622. https://doi.org/10.1016/j.str.2016.06.023.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Cifuente JO, Comino N, Madariaga-Marcos J, López-Fernández S, García-Alija M, Agirre J, et al. Structural basis of glycogen biosynthesis regulation in bacteria. Structure. 2016;24(9):1613-1622. https://doi.org/10.1016/j.str.2016.06.023.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B11">
    <label>11.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">McInerney, J. O. Why prokaryotes have pangenomes / J. O. McInerney, A. McNally, M. J. O’Connell // Nature Microbiology. - 2017. - Vol. 2. https://doi.org/10.1038/nmicrobiol.2017.40.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">McInerney JO, McNally A, O’Connell MJ. Why prokaryotes have pangenomes. Nature Microbiology. 2017;2. https://doi.org/10.1038/nmicrobiol.2017.40.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B12">
    <label>12.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Cryo-protective effect of an ice-binding protein derived from Antarctic bacteria / M. Mangiagalli, M. Bar-Dolev, P. Tedesco [et al.] // FEBS Journal. - 2017. - Vol. 284, № 1. - P. 163-177. https://doi.org/10.1111/febs.13965.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Mangiagalli M, Bar-Dolev M, Tedesco P, Natalello A, Kaleda A, Brocca S, et al. Cryo-protective effect of an ice-binding protein derived from Antarctic bacteria. FEBS Journal. 2017;284(1):163-177. https://doi.org/10.1111/febs.13965.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B13">
    <label>13.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Microevolution and adaptive strategy of psychrophilic species Flavobacterium bomense sp. nov. isolated from glaciers / Q. Liu, H.-C. Liu, Y.-G. Zhou [et al.] // Frontiers in Microbiology. - 2019. - Vol. 10. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.01069.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Liu Q, Liu H-C, Zhou Y-G, Xin Y-H. Microevolution and adaptive strategy of psychrophilic species Flavobacterium bomense sp. nov. isolated from glaciers. Frontiers in Microbiology. 2019;10. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.01069.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B14">
    <label>14.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Пикула, К. С. Психрофильные бактерии и их использование для биоремедиации арктических экосистем, загрязнённых нефтью и нефтепродуктами / К. С. Пикула, А. М. Захаренко, А. Н. Гульков // Международный студенческий научный вестник. - 2016. - № 4-3. - С. 254-255.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Pikula KS, Zakharenko AM, Gulʹkov AN. Psikhrofilʹnye bakterii i ikh ispolʹzovanie dlya bioremediatsii arkticheskikh ehkosistem, zagryaznyonnykh neftʹyu i nefteproduktami [Psychrophilic bacteria and their use for bioremediation of Arctic ecosystems polluted by oil and oil product]. International Student Research Bulletin. 2016;(4-3):254-255. (In Russ.).</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B15">
    <label>15.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Isolation and characterization of the lytic cold-active bacteriophage MYSP06 from the Mingyong glacier in China / M. Li, J. Wang, Q. Zhang [et al.] // Current Microbiology. - 2016. - Vol. 72, № 2. - P. 120-127. https://doi.org/10.1007/s00284-015-0926-3.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Li M, Wang J, Zhang Q, Lin L, Kuang A, Materon LA, et al. Isolation and characterization of the lytic cold-active bacteriophage MYSP06 from the Mingyong glacier in China. Current Microbiology. 2016;72(2):120-127. https://doi.org/10.1007/s00284-015-0926-3.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B16">
    <label>16.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Identification of probiotic strains isolated from human gastrointestinal tract and investigation of their antagonistic, antioxidant and antiproliferative properties / A. Prosekov, I. Milentyeva, S. Sukhikh [et al.] // Biology and Medicine. - 2015. - Vol. 7, № 5.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Prosekov A, Milentyeva I, Sukhikh S, Dyshlyuk L, Babich O, Asyakina L, et al. Identification of probiotic strains isolated from human gastrointestinal tract and investigation of their antagonistic, antioxidant and antiproliferative properties. Biology and Medicine. 2015;7(5).</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B17">
    <label>17.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Feller, G. Psychrophilic enzymes: from folding to function and biotechnology / G. Feller // Scientifica. - 2013. - Vol. 2013. https://doi.org/10.1155/2013/512840.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Feller G. Psychrophilic enzymes: from folding to function and biotechnology. Scientifica. 2013;2013. https://doi.org/10.1155/2013/512840.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B18">
    <label>18.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Ghosh, S. The cave microbiome as a source for drug discovery: Reality or pipe dream? / S. Ghosh, N. Kuisiene, N. Cheeptham // Biochemical Pharmacology. - 2017. - Vol. 134. - P. 18-34. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2016.11.018.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Ghosh S, Kuisiene N, Cheeptham N. The cave microbiome as a source for drug discovery: Reality or pipe dream? Biochemical Pharmacology. 2017;134:18-34. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2016.11.018.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B19">
    <label>19.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Психрофильные псевдомонады-эндофиты как потенциальные агенты в биоконтроле фитопатогенных и гнилостных микроорганизмов при холодильном хранении картофеля / А. В. Щербаков, Е. Н. Щербакова, С. А. Мулина [и др.] // Сельскохозяйственная биология. - 2017. - Т. 52, № 1. - С. 116-128. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2017.1.116rus.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Shcherbakov AV, Shcherbakova EN, Mulina SA, Rots PYu, Daryu RF, Kiprushkina EI, et al. Psychrophilic endophytic Pseudomonas as potential agents in biocontrol of phytopathogenic and putrefactive microorganisms during potato storage. Agricultural Biology. 2017;52(1):116-128. (In Russ.). https://doi.org/10.15389/agrobiology.2017.1.116rus.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
  </ref-list>
 </back>
</article>
