Улаанбаатор, Монголия
Москва, г. Москва и Московская область, Россия
Цель данной работы – идентификация и изучение пробиотического потенциала молочнокислых бактерий, выделенных из национальных молочных продуктов Монголии. Исследовали 69 образцов продуктов, включая тараг, айраг, ааруул, бяслаг и ээзгий. В результате были выделены штаммы молочнокислых бактерий, идентификация которых проведена на основе определения последовательности их 16S rДНК. Все выделенные штаммы тестированы на толерантность к низким значениям рН и желчным кислотам, газообразованию и адгезии на Caco-2 клетках. Установлено, что 10 из изученных штаммов могут быть использованы в качестве пробиотиков, при этом 6 были выделены из хоормога, изготовленного из верблюжьего молока. На основе 16S-рибосомальной rДНК анализа и углеводного профиля их идентифицировали как Lactobacillus (L.) plantarum и L. paracasei.
Молочнокислые бактерии, пробиотические свойства, молочный продукт.
Введение
Молочнокислые бактерии и бифидобактерии, как сообщается в литературе, являются пробиотиками с полезными для здоровья свойствами [3–6, 8, 10].
В соответствии с данными рабочей группы Про-довольственной и сельскохозяйственной организации объединенных наций (ООН) [9] и Всемирной орга-низации здравоохранения (ВОЗ) [10] пробиотические бактерии определены как живые микроорганизмы, которые полезны при приеме внутрь в адекватных количествах.
Монгольская культура питания отличается от за-падных культур, особенно в потреблении кисло-молочных продуктов. Молочные продукты занимали одно из ведущих мест в питании кочевых народов Монголии, для их изготовления употребляли молоко разных видов домашних животных (коров, овец, коз, яков, кобыл и верблюдиц). Национальные кисло-молочные продукты Монголии – ааруул, ээзгий и бяслаг – являются наиболее употребляемыми, но сообщений о составе их микрофлоры нами не об-наружено, в то время как о микробиологическом составе тарага, хоормога и айрага имеются данные в литературе. В Монголии и Внутренней Монголии (Китай) также проводятся исследования в данном направлении, но они пока очень малочисленны [7]. В Монголии для производства кисломолочных продук-тов применяют импортируемые типовые закваски из разных стран мира. Однако до настоящего времени в Монголии не организовано собственное произ-водство заквасок для национальных кисломолочных продуктов. В этой связи выделение и изучение свойств микрофлоры таких национальных кисло-молочных продуктов, как тараг, хоормог, ааруул, бяслаг, ээзгий, является актуальной задачей.
Объекты и методы исследований
Объектами исследований были тараг (идентичен йогурту), хоормог – кисломолочный продукт из вер-блюжьего молока, айраг – кисломолочный напиток из кобыльего молока, бяслаг (типа сыра) и другие продукты, полученные в частных хозяйствах. Всего было изучено 66 образцов традиционной монголь-ской молочной продукции (табл. 1), которые отобраны из трех регионов: Тов, Хубсугул и Дор-ноговь. В исследованиях применяли стандартные методы биохимических и микробиологических ис-следований, а также генетические методы, в част-ности 16S-рибосомальной ДНК.
Таблица 1
Названия исследованных национальных молочных продуктов,
изготовленных из разного молочного сырья в регионах Тов, Хубсугул и Дорноговь
Наимено-вание региона |
Местность |
Продукты |
||||||||
Тараг и хоормог |
Айраг |
Ааруул |
Бяслаг |
Ээзгий |
||||||
Ко-рова |
Коза |
Вер-блюд |
Овца |
Як |
Кобыла |
Корова |
Корова |
Корова |
||
Тов |
Улаанбаатар |
8 |
3 |
|
|
|
5 |
5 |
|
3 |
Тов |
Алтанбулаг |
11 |
6 |
|
2 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
Хубсугул |
Мурун |
8 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Дорноговь |
Сайншанд |
|
|
6 |
|
|
|
|
|
|
Всего |
|
27 |
9 |
6 |
2 |
1 |
7 |
8 |
1 |
5 |
Результаты и их обсуждение
Выделение и идентификация штаммов молочно-кислых бактерий. Для предварительной идентифи-кации все колонии, выделенные с питательных сред MRS и GYP, окрашивали по Граму и тестировали на каталазную активность. Из образцов национальных молочных продуктов выделили 543 изолята, все они были грамположительными и каталазанегативными (табл. 2). Штаммы, которые были грампозитивными и каталазанегативными, отнесены к молочнокислым бактериям.
Tаблица 2
Количество выделенных штаммов
из кисломолочных продуктов
Название продукта |
Количество выделенных штаммов молочнокислых бактерий |
|
Количество |
% |
|
Тараг и хоормог |
420 |
77,3 |
Айраг |
67 |
12,3 |
Ааруул |
41 |
7,6 |
Бяслаг |
15 |
2,8 |
Большинство штаммов молочнокислых бактерий выделено из тарага и хоормога – 77,3 % и составляло 420 штаммов, из айрага – 12,3 % и
составляло 67 штаммов, из ааруула – 7,6 % и сос-тавляло 41 штамм, из бяслага – 2,7 % и составляло 15 штаммов. Штаммы, выделенные из тарага и хоормога, классифицированы на 17 видов с при-менением метода 16S-рибосомальной ДНК. Все штаммы, выделенные из айрага, классифицированы на 12 видов; из ааруула – на 10 видов; из бяслага – на 5. Штаммы, выделенные из тарага, идентифициро-вали на основе 500 пар оснований цепи, начиная с
Большинство среди выделенных штаммов отнесено к следующим таксономическим группам: Lacto-bacillus (L.) delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus fermentum, Streptococcus (Str.) thermophilus. Представленные результаты иденти-фикации штаммов микроорганизмов из продукта с одним названием, но полученного на основе молока разных сельскохозяйственных животных свидетель-ствуют и о разнообразном составе присутствующей в них микрофлоры. Это можно объяснить тем, что культура и получение монгольских молочных продуктов различны, а поэтому они могут включать потенциально необычные микроорганизмы. Резуль-таты проведенных исследований позволяют заклю-чить, что доминирующими видами молочнокислых бактерий в тараге являются L. delbrueckii ssp. bulga-ricus, L. helveticus, L. fermentum и S. thermophilus.
Таблица 3
Штаммы и количество LAB изолятов,
выделенных из тарага
|
Молоко |
||||
корова |
коза |
верблюд |
овца |
як |
|
Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus |
91 |
41 |
9 |
7 |
4 |
Lactobacillus helveticus |
58 |
8 |
10 |
|
1 |
Lactobacillus fermentum |
27 |
17 |
10 |
|
3 |
Streptococcus thermophilus |
39 |
3 |
|
1 |
|
Enterococcus durans |
15 |
1 |
|
||
Lactococcus lactis ssp. lactis |
4 |
7 |
4 |
|
|
Lactobacillus pentosus |
6 |
1 |
5 |
|
|
Weissella confusa |
10 |
|
|||
Lactobacillus kefiri |
6 |
|
1 |
|
|
Lactobacillus paracasei ssp. tolerans |
2 |
|
4 |
|
|
Lactobacillus plantarum |
1 |
|
4 |
|
|
Pediococcus parvulus |
5 |
|
|||
Leuconostoc citreum |
1 |
2 |
2 |
|
|
Lactobacillus paracasei ssp. paracasei |
1 |
|
3 |
|
|
Enterococcus faecium |
2 |
|
1 |
|
|
Leuconostoc mesenteroides |
1 |
|
1 |
|
|
Weissella viridescens |
1 |
|
|
|
|
Всего |
270 |
80 |
54 |
8 |
8 |
Проверка выделенных штаммов на пробиоти-ческую активность. Выделенные штаммы молочно-кислых бактерий из монгольских молочных продук-тов были проверены на пробиотическую активность. Одной из важнейших характеристик, применяемых при отборе пробиотических штаммов, является их резистентность к желудочному соку и желчным кислотам. Выживаемость бактерий в искусственном желудочном соке анализировали путем проведения теста на толерантность к желчным кислотам путем выращивания в GYP бульоне, содержащем 0,2 % бычьей желчи.
Результаты исследований показали, что из 543 ис-следованных штаммов только 126 росли в среде бульона с добавлением 0,25 % желчи, т.е. были толерантны к желчным кислотам. Далее эти штаммы были тестированы на толерантность к желудочному соку. Считали, что штаммы толерантны к желу-дочному соку, если после их инкубации в течение 3 ча-сов c 0,04 % пепсином (pH 3,0) количество клеток составляло не менее 7 log КОЕ/мл. Из 126 штаммов, толерантных к желчным кислотам, 114 были толерант-ны к желудочному соку (табл. 4).
К важнейшей характеристической особенности пробиотических бактерий относят их адгезивную способность. Порогом адгезии считали, что коли-чество прикрепленных клеток к эпителию должно составлять 5,0×104 КОЕ/мл. 42 штамма, проявляя-ющих гомоферментативные свойства, были тести-рованы на адгезивность к Сасо-2 клеткам. Установ-лено, что 10 штаммов с числом колоний от 7,0×103 до 7,5×104 КОЕ/мл и штамм L. plantarum 05АМ23 имели наивысшие значения адгезии к Сасо-2 клеткам (табл. 4 и 5).
Таблица 4
Результаты изучения пробиотических свойств штаммов,
выделенных из национальных ферментируемых молочных продуктов Монголии
Наименование штаммов |
Количество |
Выживаемость в желчи |
Толерантность к низким рН |
Газообразование (–) |
Адгезия на Caco-2 клетках |
Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus |
155 |
8 |
2 |
2 |
0 |
Lactobacillus helveticus |
115 |
0 |
|
|
|
Lactobacillus fermentum |
78 |
50 |
50 |
0 |
|
Streptococcus thermophilus |
43 |
5 |
0 |
|
|
Enterococcus durans |
17 |
0 |
|
|
|
Weissella confusa |
16 |
16 |
16 |
0 |
|
Lactococcus lactis ssp. lactis |
20 |
2 |
2 |
2 |
0 |
Lactobacillus buchneri |
7 |
1 |
1 |
0 |
|
Lactobacillus kefiri |
10 |
0 |
|
|
|
Lactobacillus plantarum |
11 |
11 |
11 |
11 |
5 |
Lactobacillus pentosus |
13 |
9 |
9 |
9 |
0 |
Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis |
21 |
2 |
2 |
2 |
1 |
Pediococcus parvulus |
5 |
5 |
5 |
5 |
0 |
Enterococcus faecium |
5 |
0 |
|
|
|
Weissella viridescens |
6 |
6 |
6 |
0 |
|
Lactobacillus paracasei ssp. torelans |
6 |
5 |
5 |
5 |
2 |
Lactobacillus paracasei ssp. paracasei |
4 |
4 |
4 |
4 |
2 |
Lactobacillus sakei |
2 |
2 |
2 |
2 |
0 |
Leuconostoc mesenteroides |
2 |
0 |
|
|
|
Leuconostoc citreum |
6 |
0 |
|
|
|
Leuconostoc garlicum |
1 |
0 |
|
|
|
|
543 |
125 |
114 |
42 |
10 |
Таблица 5
Характеристика штаммов LAB, тестированных на пробиотическую активность
№ |
Штаммы |
Толерант-ность к желчным кислотам (%)* |
Выживаемость при низких рН (log CFU/мл)** |
Адгезия на Caco-2 клетках (×103 CFU/мл)*** |
Продукты |
Молоко |
Аймак |
Местность |
05AM23 |
L. plantarum |
97,0 |
8,1 |
75,0 |
Айраг |
Кобыла |
Тов |
Улаанбаа-тар |
06Tca8 |
L. plantarum |
88,9 |
8,2 |
7,0 |
Тараг |
Верблюд |
Дорноговь |
Сайншанд |
06Tca19 |
L. paracasei ssp. paracasei |
87,9 |
8,0 |
11,0 |
Тараг |
Верблюд |
Дорноговь |
Сайншанд |
06Tca22 |
L. paracasei ssp. paracasei |
92,6 |
8,0 |
12,0 |
Тараг |
Верблюд |
Дорноговь |
Сайншанд |
06Tca39 |
L. paracasei ssp. tolerans |
87,4 |
7,3 |
18,0 |
Тараг |
Верблюд |
Дорноговь |
Сайншанд |
06Tca40 |
L. plantarum |
85,4 |
7,7 |
13,0 |
Тараг |
Верблюд |
Дорноговь |
Сайншанд |
06Tca43 |
L. paracasei ssp. paracasei |
85,6 |
7,0 |
16,0 |
Тараг |
Верблюд |
Дорноговь |
Сайншанд |
06CC2 |
L. plantarum |
97,0 |
8,7 |
13,0 |
Ааруул |
Корова |
Тов |
Алтанбу-лаг |
06CC3 |
L. delbrueckii ssp. lactis |
83,0 |
8,5 |
27,0 |
Тараг |
Корова |
Tов |
Алтанбу-лаг |
06CC9 |
L. plantarum |
92,6 |
8,0 |
8,0 |
Ааруул |
Корова |
Тов |
Алтанбу-лаг |
* Процент выживших колоний в GYP бульоне, содержащем 0,2 % бычьей желчи по сравнению с контролем.
** Число выживших колоний LAB после обработки 0,04 % пепсином при pH 3,0 в течение 3 часов.
*** Число выживших колоний LAB, адгезированных на Caco-2 клетках после инкубации.
Таблица 6
Углеводный профиль штаммов LAB, выбранных в качестве пробиотиков
№ |
05AM23 |
06Tca8 |
06Tca19 |
06Tca22 |
06Tca39 |
06Tca40 |
06Tca43 |
06CC2 |
06CC3 |
06CC9 |
Углеводы |
1 |
1 |
2 |
2 |
2 |
1 |
2 |
1 |
3 |
1 |
D-Arabinose |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
L-Arabinose |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
D-Ribose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Xylose |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
L-Xylose |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
D-Galactose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Glucose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
D-Fructose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
D-Mannose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
L-Rhamnose |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
D-Mannitol |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Sorbitol |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
Amygdalin |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
Esculin |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
Salicin |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Celibiose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Maltose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Lactose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
D-Melibiose |
+ |
+ |
– |
– |
– |
+ |
– |
+ |
– |
+ |
D-Sucrose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
D-Trehalose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
D-Melezitose |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
– |
– |
+ |
D-Raffinose |
– |
– |
– |
– |
– |
+ |
– |
+ |
– |
+ |
Gluconate |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
– |
+ |
Starch |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
– |
Примечание: 1 – L. plantarum; 2 – L. paracasei ssp. paracasei; 3 – L. delbrueckii ssp. lactis; + позитивный; – негативный.
Известно, что молочные бактерии могут фер-ментировать углеводы с образованием преиму-щественно одного конечного продукта брожения, т.е. быть гомоферментативными, и с образованием нескольких конечных продуктов брожения, т.е. быть гетероферментативными. Данная характеристика очень важна для штаммов молочнокислых бактерий, поскольку позволяет определить целесообразность его применения в составе закваски для конкретного молочного продукта. Исследования показали, что из 114 штаммов, толерантных к желчным кислотам и желудочному соку, 42 штамма проявляли гомофер-ментные свойства, т.е. их можно применять для производства некоторых видов кисломолочных продуктов, в частности йогуртов.
Выделенные штаммы с высокой адгезивной спо-собностью были проанализированы по способности к сбраживанию углеводов. Полученные данные приведены в табл. 6.
Результаты идентификации изучаемых штаммов молочнокислых бактерий, за исключением 06TСа39 штамма, совпадали с результатами 16S-рибосо-мальной ДНК.
Для определения возможности применения вновь выделяемых штаммов молочнокислых бактерий в технологии молочных продуктов следует очень тща-тельно проверять все их характеристики. Интерес-ным представлялось определение гомологии между штаммами молочнокислых бактерий, отнесенных к одному виду, выделенных из одинаковых продуктов и одного места происхождения. Для этого был проведен RAPD-ПЦР анализ между следующими LAB штаммами: L. plantarum 06Tca8 – L. plantarum 06Tca40, L. plantarum 06CC2 – L. plantarum 06CC9, L. paracasei spp. paracasei 06Tca19 – L. paracasei spp. paracasei 06Tca22 – L. paracasei spp. paracasei 06Tca43. Анализ полученных результатов с при-менением этого метода позволяет сделать заключение, что штаммы 06Tca8 – 06Tca40, 06CC2 – 06CC9 и 06Tca19 – 06Tca22 – 06Tca43 могут представлять индивидуальные изоляты (рис. 1).
Результаты исследований показали, что штаммы 06Tca8 и 06Tca40, выделенные из хоормога, изготовленного из верблюжьего молока местности Сайншанд Дорноговь региона, и штаммы 06CC2 и 06CC9, выделенные из тарага, изготовленного из коровьего молока местности Алтанбулаг Тов аймака, относятся к L. plantarum. Штаммы 06ТСА19, 06Tca22 и 06Tca43, выделенные из хоормога, изго-товленного из верблюжьего молока местности Сайншанд Дорноговь региона, относятся к L. paraca-sei ssp. paracasei.
Основной и полезной микрофлорой в типовых йогуртах является L. delbrueckii ssp. bulgaricus и S. thermophilus. Технология производства тарага идентична технологии производства йогурта. На основе результатов проведенных исследований можно заключить, что доминирующими видами молочно-кислых бактерий в тараге являются L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. helveticus, L. fermentum и S. thermophilus. Поэтому тараг и йогурт можно рассматривать как одиноковый тип молочного продукта. Поскольку культура получения молочных продуктов в Монголии отличается от производства в других странах, они могут включать нехарактерные для йогурта микроорганизмы.
а
б
Рис. 1. Профили семи изолятов молочнокислых бактерий при проведении ПЦР со случайной ампли-фикацией: а – дорожка 1, 2, 5 и 6 – использован праймер р7, дорожка 3, 4, 7 и 8 – использован праймер р11, дорожка М – маркер ДНК, дорожка 1 и 3 – 06Tca8, дорожка 2 и 4 – 06Tca40, дорожка 5 и 7 – 06CC2, дорожка 6 и 8 – 06CC9; б – дорожка 1, 2 и 3 – использован праймер АТ41, дорожка 4, 5 и 6 – использован праймер ВТ05, дорожка М – маркер ДНК, дорожка 1 и 4 – 06ТСА19, дорожка 2 и 5 – 06Tca22, дорожка 3 и 6 – 06Tca43
В результате проведенных исследований выявлено, что доминирующими видами молочно-кислых бактерий в айраге были L. helveticus, L. delb-rueckii ssp. lactis, L. fermentum. Полученные данные отличаются от сообщенных ранее в работе [4]. Используя молекулярно-биологические методы, Watanabe et al. идентифицировали из айрага в основ-ном L. kefiranofaciens, которые не были обнаружены в исследованных нами образцах. В то же время обнаруженные и идентифицированные нами L. helveticus, L. delbrueckii ssp. lactis, L. fermentum не были обнаружены авторами работы [4]. Такие раз-личные результаты свидетельствуют о видовом разнообразии микрофлоры продукта айраг, ее воз-можном количественном и качественном изменении и необходимости продолжения исследований. Нами обнаружено, что в аарууле присутствуют гомофер-ментативные молочнокислые бактерии L. helveticus и L. delbrueckii ssp. lactis, а также гетероферментативные молочнокислые бактерии L. fermentum, L. buchnerii и W. сonfuse.
В бяслаге доминировали L. delbrueckii ssp. lactis и L. lactis spp. lactis. Есть вероятность того, что гетеро-ферментативные молочнокислые бактерии в аарууле могли быть внесены из внешней среды, так как по традиционной технологии ааруул изготавливают кипячением тарага и последующей сушкой на солнце.
Ээзгий изготавливают кипячением и упариванием на медленном огне створоженного молока с пос-ледующим дроблением сгустка и сушкой на солнце. Вероятно, из-за продолжительного высокотемпера-турного технологического процесса приготовления в ээзгий молочнокислых бактерий не обнаружили.
Установлено, что 6 из 10 штаммов молочно-кислых бактерий, выделенных из хоормога, облада-ют пробиотической активностью. Из 54 молочнокис-лых бактерий, идентифицированных как L. plantarum или L. paracasei ssp., 10 выделены из хоормога, изготовленного из верблюжьего молока.
Выводы
В результате проведенных исследований микро-флоры национальных молочных продуктов, отобран-ных в 3 регионах Монголии, удалось выделить и
идентифицировать 10 гомоферментативных про-биотических штаммов молочнокислых бактерий. Они были идентифицированы и классифицированы как L. plantarum, L. paracasei spp. Выделено большое количество гетероферментативных штаммов L. fer-mentum, толерантных к желчным солям и желу-дочному соку. Штаммы L. fermentum, которые имели сильную толерантность к желудочному соку и желчным солям, были также найдены в тради-ционных кенийских ферментированных молочных продуктах [11].
Таким образом, выделенные и идентифициро-ванные штаммы молочнокислых бактерий, обладаю-щие пробиотическими свойствами, можно рекомендовать для включения в коллекцию микроорганизмов Монголии и создания заквасок, применяемых в производстве кисломолочных продуктов.
1. Ганина, В.И. Новый синбиотический кисломолочный напиток / В.И. Ганина, Е.Н. Терешина, Л.В. Кали¬нина, С.И. Перминов // Молочная промышленность. - 2008. - № 10. - С. 85.
2. Ганина, В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии: монография / В.И. Га¬нина. - М.: МГУПБ, 2001. - 169 с.
3. Gupta, V. Probiotics / V. Gupta, R. Garg // Indian Journal of Medical Microbiology, 2009, 27. - Р. 202-209.
4. Ishida, Y. Clinical effects of Lactobacillus acidophilus strain L-92 on perennial allergic rhinitis: a double-blind, placebo-controlled study / Y. Ishida, F. Nakamura, H. Kanzato, D. Sawada, H. Hirata, A. Nishimura, O. Kajimoto, S. Fujiwara // Journal of Dairy Science, 2005, 88, 527-533.
5. Kato, K. Randomized placebo controlled trial assessing the effect of bifidobacteria fermented milk on active ulcer¬ative colitis / K. Kato, S. Mizuno, Y. Umesaki, Y. Ishii, M. Sugitani, A. Imaoka, M. Otsuka, O. Hasunuma, R. Kurihara, A. Iwasaki, Y. Arakawa // Alimentary pharmacology & therapeutics, 2004, 20, 1133-1141.
6. Rosenfeldt, V. Effect of probiotic Lactobacillus strains in children with atopic dermatitis / V. Rosenfeldt, E. Benfeldt, S.D. Nielsen, K.F. Michaelsen, D.L. Jeppesen, N.H. Valerius, A. Paerregaard // The Journal of allergy and clinical immunology, 2003, 111, 389-395.
7. Shuangquan. Microflora in traditional starter cultures for fermented milk, hurunge, from Inner Mongolia, China / Shuangquan, Burentegusi, Yu B, T. Miyamoto // Animal Science Journal, 2006, 77, 235-241.
8. Sullivan, Å. Probiotics and gastrointestinal diseases / Å. Sullivan, E.C. Nord // Journal of internal Medicine, 2005, 257, 78-92.
9. WHO, Health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with livelactic acid bacte¬ria, a joint FAO/WHO expert consultation // Cordoba, Argentina, 1-4 October 2001 [homepage on the Internet].
10. World health organization (WHO) [cited 13 July 2009]. Available from URL.
11. Mathara, J.M. Functional characteristics of Lactobacillus spp. From traditional Maasai fermented milk products in Kenya / J.M. Mathara, U. Schillinger, C. Guigas, C. Franz, P.M. Kutima, S.K. Mbugua, H.K. Shin, W.H. Holzapfel // International Journal of Food Microbiology, 2008, 126, 57-64.