<!DOCTYPE article
PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.4 20190208//EN"
       "JATS-journalpublishing1.dtd">
<article xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" article-type="research-article" dtd-version="1.4" xml:lang="en">
 <front>
  <journal-meta>
   <journal-id journal-id-type="publisher-id">Food Processing: Techniques and Technology</journal-id>
   <journal-title-group>
    <journal-title xml:lang="en">Food Processing: Techniques and Technology</journal-title>
    <trans-title-group xml:lang="ru">
     <trans-title>Техника и технология пищевых производств</trans-title>
    </trans-title-group>
   </journal-title-group>
   <issn publication-format="print">2074-9414</issn>
   <issn publication-format="online">2313-1748</issn>
  </journal-meta>
  <article-meta>
   <article-id pub-id-type="publisher-id">41355</article-id>
   <article-id pub-id-type="doi">10.21603/2074-9414-2020-4-650-659</article-id>
   <article-categories>
    <subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="ru">
     <subject>ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ</subject>
    </subj-group>
    <subj-group subj-group-type="toc-heading" xml:lang="en">
     <subject>ORIGINAL ARTICLE</subject>
    </subj-group>
    <subj-group>
     <subject>ОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯ</subject>
    </subj-group>
   </article-categories>
   <title-group>
    <article-title xml:lang="en">Electrochemical and Optical Microbiological Testing: a Comparative Study on Properties of Essential Oils</article-title>
    <trans-title-group xml:lang="ru">
     <trans-title>Методика оптико-электрохимического микробиологического тестирования в применении к сравнительному анализу свойств эфирных масел</trans-title>
    </trans-title-group>
   </title-group>
   <contrib-group content-type="authors">
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-0829-5213</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Сибирцев</surname>
       <given-names>Владимир Станиславович</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Sibirtsev</surname>
       <given-names>Vladimir S.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <email>vs1969r@mail.ru</email>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-1"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-4102-1129</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Нечипоренко</surname>
       <given-names>Ульяна Юрьевна</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Nechiporenko</surname>
       <given-names>Uliana Yu.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-2"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0001-9085-2984</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Кабанов</surname>
       <given-names>Владимир Леонидович</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Kabanov</surname>
       <given-names>Vladimir L.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-3"/>
    </contrib>
    <contrib contrib-type="author">
     <contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0003-1722-4644</contrib-id>
     <name-alternatives>
      <name xml:lang="ru">
       <surname>Кукин</surname>
       <given-names>Михаил Юрьевич</given-names>
      </name>
      <name xml:lang="en">
       <surname>Kukin</surname>
       <given-names>Mikhail Yu.</given-names>
      </name>
     </name-alternatives>
     <xref ref-type="aff" rid="aff-4"/>
    </contrib>
   </contrib-group>
   <aff-alternatives id="aff-1">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых добавок</institution>
     <city>Санкт-Петербург</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">All-Russia Research Institute for Food Additives</institution>
     <city>St. Petersburg</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-2">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых добавок</institution>
     <city>Санкт-Петербург</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">All-Russia Research Institute for Food Additives</institution>
     <city>St. Petersburg</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-3">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых добавок</institution>
     <city>Санкт-Петербург</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">All-Russia Research Institute for Food Additives</institution>
     <city>St. Petersburg</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <aff-alternatives id="aff-4">
    <aff>
     <institution xml:lang="ru">Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых добавок</institution>
     <city>Санкт-Петербург</city>
     <country>Россия</country>
    </aff>
    <aff>
     <institution xml:lang="en">All-Russia Research Institute for Food Additives</institution>
     <city>St. Petersburg</city>
     <country>Russian Federation</country>
    </aff>
   </aff-alternatives>
   <volume>50</volume>
   <issue>4</issue>
   <fpage>650</fpage>
   <lpage>659</lpage>
   <self-uri xlink:href="http://fptt.ru/eng/?page=archive&amp;jrn=59&amp;article=7">http://fptt.ru/eng/?page=archive&amp;jrn=59&amp;article=7</self-uri>
   <abstract xml:lang="ru">
    <p>Введение. В последнее время для развития системы мониторинга качества и безопасности пищевой и иной продукции актуальной становится проблема разработки доступных для широкого применения методов оценки микробиологической контаминированности и биологической активности образцов такой продукции. Это определило цель исследования.&#13;
Объекты и методы исследования. 10 эфирных масел, полученных из разных видов растительного сырья. Они могут использоваться в качестве функциональных добавок к различной пищевой и иной продукции. &#13;
Результаты и их обсуждение. Разработана методика биотестирования, предусматривающая периодическую регистрацию изменений интенсивности упругого светорассеяния, рН и электропроводности жидкой питательной среды, инкубируемой в присутствии и в отсутствие жизнеспособных тестовых микроорганизмов и тестируемых образцов. Представлены результаты сравнительного анализа с помощью данной методики антибиотической активности разных концентраций эфирных масел. Проведенные исследования подтвердили, что при снижении концентрации эфирных масел в тестовой среде монотонно уменьшалась их антибиотическая активность. Краткосрочная биологическая активность эфирных масел была больше их долгосрочной активности. А среднесрочная биологическая активность эфирных масел была промежуточной по величине и лишь иногда превышала не только долгосрочную, но и краткосрочную биологическую активность. Среди исследованных эфирных масел наиболее активные долгосрочные антибиотические свойства проявили экстракты из листьев туи западной (Thuja occidentalis), эвкалипта шаровидного (Eucalyptus globulus) и кипариса вечнозеленого (Cupressus sempervirens). &#13;
Выводы. Разработанная методика позволяет существенно экспрессно, объективно и информативно, а также менее трудоемко и материалоемко, чем при использовании стандартных визуальных микробиологических методов, оценивать влияние на динамику жизненной активности микроорганизмов различных тестируемых образцов.</p>
   </abstract>
   <trans-abstract xml:lang="en">
    <p>Introduction. The national economy is currently developing a system for monitoring the quality and safety of goods. Food products, ingredients, and additives possess various pro- and antibiotic properties. Therefore, available express methods of quantitative assessment of microbiological contamination are a relevant aspect of domestic food industry.&#13;
Study objects and methods. The study featured ten essential oils of plant origin that can be used as functional additives to various food products.&#13;
Results and its discussion. The research introduced a new biotesting technique for repetitive recording of changes in the intensity of elastic light dispersion. The technique made it possible to measure pH and electrical conductivity of a liquid nutrient medium incubated in the presence and absence of viable test microorganisms and test samples. The paper describes the results of this technique applied to a comparative analysis of antibiotic activity of various essential oils in different concentrations. As the concentrations of the test extracts decreased, their antibiotic activity monotonically also went down, while the probiotic activity increased. The shortterm biological activity of test samples appeared to be significantly higher than their long-term activity. The medium-term biological activity of the test samples was mostly intermediate in value. Only rarely did it exceed both the long- and short-term biological activity of the same TE. The essential oils obtained from the leaves of Thuja occidentalis, Eucalyptus globulus, and Cupressus sempervirens exhibited the most active and long antibiotic properties.&#13;
Conclusion. The biological activity of food products, including various plant extracts, depends not only on the raw material and the extraction method, but also on the concentration of the extract in the product. As a rule, the exact nature of these dependencies can only be established empirically and requires a set of various tests. The present article introduces a new highly objective and informative express methodology that simplifies this process. The technique is less labor-, time-, and material-consuming than standard visual microbiological methods. It can be used to assess the effect of test samples on the vital activity of microorganisms in various foods, ingredients, and additives.</p>
   </trans-abstract>
   <kwd-group xml:lang="ru">
    <kwd>Растительные экстракты</kwd>
    <kwd>эфирные масла</kwd>
    <kwd>биотестирование</kwd>
    <kwd>антибиотические свойства</kwd>
    <kwd>контаминированность</kwd>
   </kwd-group>
   <kwd-group xml:lang="en">
    <kwd>Plant extracts</kwd>
    <kwd>essential oils</kwd>
    <kwd>biotesting</kwd>
    <kwd>antibiotic properties</kwd>
    <kwd>contamination</kwd>
   </kwd-group>
  </article-meta>
 </front>
 <body>
  <p>ВведениеВ последнее время в пищевой, а также во многихдругих отраслях народного хозяйства актуальнойстановится проблема разработки объективныхи в то же время экспрессных и доступных дляширокого применения методов количественнойоценки про- и антибиотических свойств образцовкак новой, так и уже допущенной к применениюпродукции. В последнем случае вышеупомянутыеметоды являются одной из важных составляющихсистемы мониторинга качества и безопасностипродукции. При их реализации применяются какмногоклеточные, так и одноклеточные тестовыеживые организмы. Последние используются нетолько как дешевая, доступная и статистическидостоверная модель живых организмов, но и какмодель полезной естественной микробиоты человека,а также природной микробиоты, способной вызыватьразличные инфекционные заболевания, токсикозы,аллергические реакции, способствовать порчепищевой и иной продукции и т. д.Однако принятые в настоящее время вкачестве стандартных при микробиологическомтестировании процедуры визуальной оценки общейвыживаемости микроорганизмов либо величинызоны задержки роста их колоний требуют длясвоего проведения значительных затрат времени,материалов и труда квалифицированного персонала.Результатом является неполная, субъективнаяи «статичная» информация о нарушенияхжизнедеятельности тестовых организмов [1–5].Таким образом, перспективным представляетсяиспользование в микробиологическом тестированииинструментальных технологий, среди которыхпростыми в исполнении, достоверными и универса-льными являются различные оптические иэлектрохимические методы.Кроме того, в последнее время в пищевойпродукции, производимой и потребляемойчеловеческим обществом, ощущается недостатокбиологически активных веществ (БАВ) природногопроисхождения. БАВ способствуют нормальномуразвитию и функционированию как самогочеловеческого организма (часто дополнительноослабленного стрессами, наличием различныхфизико-химических факторов загрязнения окру-жающей среды, недостатком природногоосвещения и физической активности, контактамис многочисленной посторонней микробиотой,которая агрессивна по отношению к человеческомуорганизму и т. п.), так и симбиотически связаннойс ним полезной микробиоты, либо угнетениюжизнедеятельности вредной для человекамикробиоты.Производство концентрированных синтети-ческих аналогов БАВ при современном уровнеразвития технологий часто является затратнымс экономической точки зрения, а такжемалоэффективным из-за сложности достижениянужной степени чистоты, стереоспецифичности идругих параметров данной продукции, способныхобеспечить высокую степень биологическойактивности таких соединений. Кроме того,растительные экстракты, по сравнению ссинтетическими средствами, обладают меньшимипо широте спектра и интенсивности действия наassessment of microbiological contamination are a relevant aspect of domestic food industry.Study objects and methods. The study featured ten essential oils of plant origin that can be used as functional additives to various foodproducts.Results and its discussion. The research introduced a new biotesting technique for repetitive recording of changes in the intensityof elastic light dispersion. The technique made it possible to measure pH and electrical conductivity of a liquid nutrient mediumincubated in the presence and absence of viable test microorganisms and test samples. The paper describes the results of this techniqueapplied to a comparative analysis of antibiotic activity of various essential oils in different concentrations. As the concentrations ofthe test extracts decreased, their antibiotic activity monotonically also went down, while the probiotic activity increased. The shorttermbiological activity of test samples appeared to be significantly higher than their long-term activity. The medium-term biologicalactivity of the test samples was mostly intermediate in value. Only rarely did it exceed both the long- and short-term biologicalactivity of the same TE. The essential oils obtained from the leaves of Thuja occidentalis, Eucalyptus globulus, and Cupressussempervirens exhibited the most active and long antibiotic properties.Conclusion. The biological activity of food products, including various plant extracts, depends not only on the raw material andthe extraction method, but also on the concentration of the extract in the product. As a rule, the exact nature of these dependenciescan only be established empirically and requires a set of various tests. The present article introduces a new highly objective andinformative express methodology that simplifies this process. The technique is less labor-, time-, and material-consuming thanstandard visual microbiological methods. It can be used to assess the effect of test samples on the vital activity of microorganisms invarious foods, ingredients, and additives.Keywords. Plant extracts, essential oils, biotesting, antibiotic properties, contaminationFor citation: Sibirtsev VS, Nechiporenko UYu, Kabanov VL, Kukin MYu. Electrochemical and Optical Microbiological Testing: aComparative Study on Properties of Essential Oils. Food Processing: Techniques and Technology. 2020;50(4):650–659. (In Russ.).https://doi.org/10.21603/2074-9414-2020-4-650-659.652Sibirtsev V.S. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2020, vol. 50, no. 4, pp. 650–659человеческий и другие живые организмы побочнымиэффектами.В результате экстракты из различногорастительного сырья в настоящее времяявляются одним из наиболее приемлемых ираспространенных источников БАВ, используемыхв качестве функциональных добавок к пищевой,фармацевтической и иной продукции. Из различныхвидов растительных экстрактов наиболее широкоераспространение в настоящее время получилиэфирные масла. Их получают промышленно илилабораторно из различного растительного сырьяфизико-химическими способами (холодный илигорячий отжим, дистилляция, экстрагирование принормальных либо повышенных давлении и/илитемпературе с помощью различных органическихрастворителей с последующим удалением этихрастворителей при повышенной температуре илипод вакуумом и т. п.) [6]. При этом холодный отжимобеспечивает наименьший выход конечного продуктаиз исходного сырья. Но данный метод являетсянаиболее щадящим, позволяя лучше всего сохранятьпервичную и пространственную структуру БАВ,содержащихся в исходном сырье. Это обеспечиваетих наивысшую биологическую активность.Дистилляция с водяным паром является наиболеераспространенным на сегодняшний день методомполучения эфирных масел. Однако в эфирныхмаслах, первым этапом получения которых являетсяэкстракция растительных БАВ органическимирастворителями (иногда весьма токсичными), дажена конечном этапе их получения остается большоеколичество органических экстрагентов. Поэтомуэфирные масла являются плохо пригодными длявнутреннего употребления.Эфирные масла, получаемые описаннымивыше способами, позволяют достичь большей истабильной биологической активности конечногопродукта по сравнению с водными, спиртовыми ииными растительными экстрактами, получаемымибез удаления экстрагентов. Эфирные масла,получаемые «холодными» методами, богаче посоставу и биологической активности экстрагируемыхв них растительных БАВ, но содержат меньшиеконцентрации последних. Поэтому в настоящеевремя эфирные масла широко (среди другихвидов растительных экстрактов) применяются впищевой и других отраслях промышленности вкачестве добавок, обладающих избирательнымлибо малоспецифическим про- или антимикробнымдействием (используемым, в том числе, прилечении различных респираторных заболеваний,а также заболеваний зубов, полости рта и т.п.), добавок, обладающих различными видаминормализирующего действия (используемого, в томчисле, при лечении различных нервных, сердечно-сосудистых, диабетических, пищеварительныхи иных заболеваний), а также консервирующих,антиоксидантных, ароматизирующих, вкусовых ииных видов добавок [1–3, 6–16]. Кроме того, эфирныемасла используются в качестве антисептиков,экологически безопасных инсектицидов и пестицидов,добавок к различным зуботерапевтическим,ранозаживляющим и другим медицинским иупаковочным материалам (съедобным, биоразла-гаемым, обладающим выраженным антимикробнымдействием и т. п.) [7, 17–21].Целью исследования стала разработка экспресснойи объективной инструментальной методики оценкимикробиологической контаминированности, про- иантибиотических свойств различной пищевой ииной продукции, а также отдельных ингредиентов идобавок к ней с последующим анализом влияния надинамику жизнедеятельности микробиоты человекаразличных растительных экстрактов.Объекты и методы исследованияВ качестве объектов исследования в настоящейработе были взяты эфирные масла, полученныеиз следующих видов растительного сырья: хвояели обыкновенной (Pícea abies) (№ 1), хвоя сосныобыкновенной (Pínus sylvestris) (№ 2), хвоя пихтысибирской (Abies sibirica) (№ 3), хвоя и семена кедраcибирского (сосна сибирская кедровая Pínus sibírica)(№ 4 и № 5 соответственно), хвоя кедра атласского(Cedrus atlantica) (№ 6), ягоды можжевельникаобыкновенного (Juniperus communis) (№ 7), листьякипариса вечнозеленого (Cupressus sempervirens)(№ 8), листья туи западной (Thuja occidentalis) (№ 9)и листья эвкалипта шаровидного (Eucalyptus globulus)(№ 10).Указанные эфирные масла были закупленыу крупных российских производителей: Mirrolla(https://mirrolla.ru), Botanika (https://botavikos.ru) иOleos (https://oleos-info.ru). Причем при наличииу этих компаний эфирных масел, получаемыхиз «одинаковых» видов растительного сырья,предпочтение отдавалось компаниям, стоящим левеев указанном выше списке.Результаты и их обсуждениеДля анализа влияния различных концентрацийэфирных масел на динамику жизнедеятельностимикроорганизмов, учитывая результаты авторскихнаработок по различным способам инстру-ментального биотестирования, была разработанаследующая методика [22–27].Для каждой партии эфирных масел проводилосьпо четыре серии измерений. Перед началом каждойготовилась питательная среда, представлявшаясобой стерильный водный раствор с рН 7,2 ± 0,2,содержащий 5 г/л глюкозы, 20 г/л белковогогидролизата и 2 г/л NaCl. Затем питательная средазасевалась Lactobacillus acidophilus АТСС 4356.653Сибирцев В. С. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2020. Т. 50. № 4 С. 650–659Они были выбраны в качестве типичныхпредставителей микробиоты, широко распро-страненной как во вне, так и внутри организмачеловеческа и других живых организмов. L.acidophilus активно участвуют в деструкцииразличных биополимеров, а также широкоиспользуются человеком во многихбиотехнологических процессах, включаябиоконсервирование, силосование, получениеразличной кисломолочной продукции и т. п. Далеепитательная среда с тестовыми микроорганизмамиинкубировалась при 37 ± 0,1 ºС, пока содержаниежизнеспособных микроорганизмов в ней недостигало примерно 5×106 кл/мл (что удостоверялосьнефелометрическим способом по бактериальномустандарту мутности).Полученная тестовая среда разливалась поизмерительным емкостям (ИЕ). В каждую (заисключением 3 контрольных-1 ИЕ, содержащихтестовую среду с жизнеспособными микроорга-низмами без эфирных масел, но с добавлением3-х контрольных-2 ИЕ, содержащих стерильнуюпитательную среду с тем или иным эфирным маслом)предварительно добавлялось (по 3 ИЕ в параллель)количество тестируемого объекта (эфирные масла,получаемые из растительного сырья), необходимоедля достижения заданной концентрации эфирныхмасел в тестовой среде. Затем как тестовые, так ивсе контрольные ИЕ, инкубировались при 37 ± 0,1 ºСв течение 6 часов. При этом у тестовых сред,содержащихся в каждой ИЕ, последовательнои с интервалом в 2 часа регистрировалисьинтенсивность упругого светорассеяния в видимойобласти спектра (Iod), рН и удельная, линейная,низкочастотная электропроводность (Х, мСм/см).Iod регистрировалась с помощью нефелометра«WGZ-2»; рН регистрировалось с помощью иономера«Эксперт-001» (Россия) с комбинированнымэлектродом «ЭСК-10601/7»; а Х регистрироваласьс помощью кондуктометра «Эксперт-002» (Россия)с датчиком «УЭП-П-С», работающим на частоте1,6 кГц. После чего общая степень активирования/ингибирования (+/–) жизнедеятельности тестовыхмикроорганизмов заданными концентрациямитестируемых эфирных масел рассчитывалась поформуле:εV,k = ( εIod,k + 0,7εрH,k + 0,7εX,k ) / 2,4 (1)где εIod,k, εрН,k и ε X,k определялись отдельно порезультатам измерений Iod, pH и X у тестовых сред,содержащихся в ИЕ, в ходе инкубации этих ИЕ поформуле:εi,k = 100 × ( ΔYti,k – ΔYci,k ) / ΔYci,k (2)где ΔYti,k и Δ Yci,k – усредненные по выборке изN образцов с одинаковыми концентрациями эфирныхмасел, приготовленных одинаковым способом изодного вида растительного сырья (в нашем случаеN = 3×4 = 12), изменения значений i-параметратестовой среды (где i = 1, 2 и 3 соответствуюттаким параметрам тестовой среды, как Iod, pH и X),произошедшие за k часов от начала инкубированияэтой среды в присутствии заданной концентрацииэфирного масла (ΔYt, наблюдаемое в тестовых ИЕ)либо в отсутствие эфирного масла (ΔYc, наблюдаемоев контрольных-1 ИЕ, тестовые среды в которыхсодержали жизнеспособные микроорганизмы, но несодержали эфирных масел).Ошибка определения каждой из усредненныхвеличин εIod,k, εрH,k и ε X,k рассчитывалась стандартнымобразом, как ΔεY = tα,N–1σY, с использованиемкритерия Стьюдента (tα,N–1 для уровня достоверностиα = 0,95 и числа степеней свободы N–1),математического ожидания (εY,S = ΣεY,i/N) и егодисперсии (σY = [Σ(εY,i–εY,S)2 / (N–1)]1/2) [28, 29].После чего полученные значения ΔεрH,k, ΔεЕ,k и ΔεX,kсуммировались для величины εV,k по стандартнойформуле Δz(xi) = Σi(Δxiδz/δxi), исходя из которойΔεV,k = ( ΔεIod,k + 0,7ΔεрH,k + 0,7ΔεX,k ) / 2,4 [28, 29] .Параметры Iod, pH и X были выбраны для оценкиобщей степени активирования или ингибированияжизнедеятельности тестовых микроорганизмовзаданными концентрациями тестируемых экстрактов,т. к. они надежно измеряются инструментально.При этом они чувствительно связаны с изменениемколичества и размера микроорганизмов,присутствующих в еденице объема тестовой среды(в случае Iod, чем больше клеток микроорганизмовприсутствует в тестовой среде, тем интенсивней онирассеивают втдимый свет). Также с тем на сколько %по отношению к контролю ускорялось либозамедлялось преобразование жизнеспособнымимикроорганизмами катаболитов, присутствующимив тестовой среде, в анаболиты после k часових инкубации при заданными температуре иконцентрации эфирного масла, по сравнению стеми же процессами, осуществляемыми теми жемикроорганизмами в той же среде в отсутствиеэфирных масел. В случае pH и X преобразованиемикроорганизмами катаболитов, присутствующих втестовой среде, в анаболиты существенно изменяеткислотность и электропроводность последних.Правомерность объединения в εV величин εIod, εрH иεX можно объяснить тем, что каждая из этих величиннезависимо нормировалась на контрольные значенияопределяющего ее показателя. Таким образом,единообразно (в % по отношению к контролю)отражала изменение метаболизма тестовыхмикроорганизмов в присутствии тестируемогоэфирного масла, в то же время по-разномухарактеризуя это изменение (поскольку изменениеIod, рН и Х в тестовой среде обуславливали разныеметаболитические процессы, осуществляемыеприсутствующими там жизнеспособными микро-654Sibirtsev V.S. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2020, vol. 50, no. 4, pp. 650–659организмами). В результате чего суммарнаявеличина εV информативно и адекватно характери-зовала изменения метаболической активноститестовых микроорганизмов, чем каждая из величинεIod, εрH и εX по отдельности.Последнее подтверждается тем, что для εV имеламесто 90 % достоверная корреляция с изменениемколичества колоний образующих единиц (КОЕ)тестовых микроорганизмов, определяемым сприменением стандартной методики [1–5]. Подсчетколоний L. acidophilus производили через 24 чинкубации при 37 °С на плотной питательнойсреде (жидкая питательная среда с добавлением20 г/л микробиологического агар-агара).Сравнение производили после инкубации тестовыхмикроорганизмов в присутствии и в отсутствие 1об.% какого-либо из тестируемых эфирных маселс контролем-1 (те же микроорганизмы в той жетестовой среде, но без эфирных масел). Высеваниепроводилось для нескольких последовательныхразведений тестовой среды (каждое в несколькопараллельных чашек Петри). После отбирались теразведения, при использовании которых на однойчашке Петри вырастало не менее 10 и не более 50колоний тестовых микроорганизмов. Данные по нимстатистически обрабатывались.Микробиологическая контаминированность (CM)тестируемых образцов могла быть рассчитанапо формулам, аналогичным 1 и 2. Однако ΔYtопределялась не для тестовых, а для контрольных-1ИЕ, а ΔYc определялась для контрольных-2ИЕ, содержащих какое-либо из тестируемыхэфирных масел в стерильной питательной среде.Полученное значение CM* домножалось накалибровочный коэффициент, определяемый предва-рительно на основании сравнения результатов,полученных с помощью описанной выше методики, срезультатами, полученными для тех же концентрацийэфирных масел с помощью вышеупомянутойстандартной методики микробиологическоготестирования. При этом CM показывало сколькожизнеспособных микроорганизмов исходноприсутствовало в тестируемом образце. Есливместо общенакопительной питательной среды,использованной в этой работе, тестируемый образецинкубировать в селективных питательных средах,то указанным выше способом можно определять нетолько общую контаминированность тестируемогообразца, но и применительно к отдельным видам иштаммам микроорганизмов.Данные, полученные описанным выше способом,представлены в таблице 1.Долгосрочную (пролонгированную) антибиоти-ческую активность тестируемых экстрактовоценивали по величине εV,6, определяемой через 6 чТаблица 1. εV,k (%), определявшиеся через 2, 4 и 6 часов инкубирования Lactobacillus acidophilus в присутствии разныхколичеств эфирных масел (ЭфМ), изготовленных из разного растительного сырьяTable 1. εV,k (%) determined after 2, 4, and 6 h of incubation of Lactobacillus acidophilus in the presence of different amountsof essential oils of various plant origin№ сырья № 1 № 2 № 3 № 4 № 5 № 6 № 7 № 8 № 9 № 10конц. ЭфМ 1 об.%εV,2 , % –72 –65 –78 –67 –70 –79 –68 –91 –85 –89εV,4 , % –67 –59 –69 –61 –67 –70 –59 –80 –79 –80εV,6 , % –62 –55 –65 –58 –64 –60 –53 –69 –73 –71конц. ЭфМ 0,5 об.%εV,2 , % –55 –48 –51 –50 –54 –41 –28 –53 –62 –70εV,4 , % –42 –47 –45 –42 –49 –37 –30 –49 –56 –56εV,6 , % –35 –33 –42 –34 –44 –34 –27 –45 –50 –48конц. ЭфМ 0,3 об.%εV,2 , % –34 –27 –36 –29 –34 –34 –21 –37 –39 –44εV,4 , % –30 –24 –32 –26 –31 –26 –23 –35 –35 –35εV,6 , % –25 –22 –27 –24 –28 –22 –19 –30 –31 –31конц. ЭфМ 0,1 об.%εV,2 , % –23 –17 –23 –21 –23 –18 –14 –18 –25 –23εV,4 , % –21 –18 –19 –18 –20 –16 –15 –21 –21 –18εV,6 , % –16 –15 –17 –16 –18 –15 –13 –18 –19 –18Методику определения общих степеней активирования/ингибирования (+/–) жизнедеятельности тестовых микроорганизмов разнымиконцентрациями различных ЭфМ (εV,k, где k = 2, 4 и 6 ч инкубирования), а также соответствие № 1–10 видов сырья, использованного дляприготовления ЭфМ, смотрите в разделе «Объекты и методы исследования». Относительная ошибка определения εV для всех указанных втаблице значений находилась в диапазоне от 10 до 20 %.See Objects and Methods for 1) the method for determining the general degrees of activation/inhibition (+/–) of the vital activity of test microorganismsdepending on the concentration of various essential oils (εV,k, where k = 2, 4, and 6 h of incubation), 2) compliance with the ten types of raw materialsused to prepare the essential oils. The relative error in determining εV for all values in the table was between 10 and 20%.655Сибирцев В. С. [и др.] Техника и технология пищевых производств. 2020. Т. 50. № 4 С. 650–659инкубации тестовой среды с жизнеспособнымимикроорганизмами в присутствии заданнойконцентрации того или иного эфирного масла. Приэтом в порядке убывания εV,6 (характеризующегопо нашим оценкам увеличение антибиотическойактивности тестируемого объекта) эфирные масла,получаемые из различных видов растительногосырья, можно было упорядочить следующимобразом, где в скобках после № сырья указанысоответствующие ему εV,6 (табл. 1):«№ 9 (–73) &gt; № 10 (–71) &gt; № 8 (–69) &gt;&gt; № 3 (–65) &gt;№ 5 (–64) &gt;&gt; № 1 (–62) &gt; № 6 (–60) &gt; № 4 (–58) &gt;&gt;№ 2 (–55) &gt; № 7 (–53)» (для 1 об.% эфирных масел втестовой среде);«№ 9 (–50) &gt; № 10 (–48) &gt;&gt; № 8 (–45) &gt; № 5 (–44) &gt;№ 3 (–42) &gt;&gt;&gt; № 1 (–35) &gt; № 4 (–34) ≈ № 6 (–34) &gt;№ 2 (–33) &gt;&gt;&gt; № 7 (–27)» (для 0,5 об.% эфирныхмасел в тестовой среде);«№ 9 (–31) ≈ № 10 (–31) &gt; № 8 (–30) &gt; № 5 (–28) &gt;№ 3 (–27) &gt; № 1 (–25) &gt; № 4 (–24) &gt; № 2 (–22) ≈ № 6(–22) &gt;&gt; № 7 (–19)» (для 0,3 об.% эфирных масел втестовой среде);«№ 9 (–19) &gt; № 5 (–18) ≈ № 8 (–18) ≈ № 10 (–18)&gt; № 3 (–17) &gt; № 1 (–16) ≈ № 4 (–16) &gt; № 2 (–15) ≈№ 6 (–15) &gt; № 7 (–13)» (для 0,1 об.% эфирных масел втестовой среде).Видно, что с изменением концентраций эфирныхмасел в тестовой среде может меняться и характерих биологической активности относительно другихэфирных масел. Из лябых частей разных растенийможно экстрагировать различные БАВ. Отчетливоэто видно на примере сравнения антибиотическойактивности эфирных масел, полученных из хвои исемян кедра сибирского (№ 4 и № 5 соответственно),а также листьев туи западной (№ 9), для которых приих концентрации в тестовой среде равной 1 об.% εV,6составили –58, –64 и –73 % соответственно.Среди исследованных эфирных масел активныепролонгированные (долгострочные) антимикробныесвойства в отношении тестовых микроорганизмов(характеризуемые в таблице 1 величиной εV,6,определяемой через 6 ч инкубации тестовыхмикроорганизмов в присутствии тестируемыхэкстрактов) проявили эфирные масла, полученные излистьев туи западной (№ 9), эвкалипта шаровидного(№ 10) и кипариса вечнозеленого (№ 8).Начальная (краткосрочная) антибиотическаяактивность эфирных масел (характеризуемая втаблице 1 величиной εV,2, определяемой через2 ч инкубации тестовых микроорганизмов вприсутствии эфирных масел) в большинствеслучаев была существенно больше их долгосрочнойактивности. Это объяснялось как адаптацией этихмикроорганизмов к присутствию тестируемогоэфирного масла, так и уменьшением с течениемвремени активности и общего количества БАВ,содержащихся в тестируемом эфирном масле,приходящегося на один тестовый микроорганизм(поскольку общее количество тестовыхмикроорганизмов во время инкубации тестовойсреды увеличивалось, тогда как активность и общееколичество БАВ, содержащихся в тестируемыхэфирных маслах, в ходе инкубации содержащихих тестовых сред не только не увеличивались, нодаже уменьшались из-за биохимической и физико-химической денатурации и деструкции упомянутыхБАВ).Среднесрочная (по времени взаимодействияэфирных масел с тестовыми микроорганизмами)антибиотическая активность эфирных масел(характеризуемая в таблице 1 величиной εV,4,определяемой через 4 ч инкубации тестовойсреды с эфирным маслом) в большинствеслучаев была промежуточной по величинемежду εV,2 и ε V,6. Лишь иногда (например, ЭфМ№ 7 в концентрациях ниже 0,5 об.%, а также ЭфМ№ 2 и № 8 в концентрациях 0,1 об.%) превышала нетолько долго-, но и краткосрочную антибиотическуюактивность того же эфирного масла.При этом с уменьшением концентраций эфирныхмасел в тестовой среде их антибиотическаяактивность в отношении тестовых микроорганизмовмонотонно уменьшалась. Например, приконцентрациях 1, 0,3 и 0,1 об.% долгосрочнаяантибиотическая активность эфирных масел излистьев туи западной (№ 9) была равна –73, –31 и–19 %; а εV,6 эфирных масел из ягод можжевельникаобыкновенного (№ 7) была равна –53, –19 и –13 %соответственно.ВыводыС помощью представленной в настоящей работеметодики можно экспрессно (в течение несколькихчасов, а не суток), объективно (за счет уменьшенияроли субъективного человеческого факторапри замене в процессе измерений визуальныхметодов на инструментальные) и информативно,чем при использовании стандартных методов,оценивать исходную микробиологическуюконтаминированность (не только общую, но иприменительно к отдельным видам и штаммаммикроорганизмов), влияние на динамикужизненной активности тестовых микроорганизмовразличных образцов пищевой и иной продукции,а также отдельных ингредиентов и добавок к ней(включая различные растительные экстракты).При этом большая информативность предлагаемойметодики достигается за счет того, что, во-первых, инструментальные способы измерениячувствительней визуальных (применяемых встандартных методах). Во-вторых, предлагаемаяметодика дает возможность оценивать динамикуизменения жизненной активности микроорганизмовна множестве произвольно выбираемых времен-656Sibirtsev V.S. et al. Food Processing: Techniques and Technology, 2020, vol. 50, no. 4, pp. 650–659ных отрезков (в отличие от стандартныхпроцедур, где измерения производятся лишь одинраз, в конце периода инкубации тестируемыхобразцов). В-третьих, предлагаемая методикапредполагает оценку изменения жизненнойактивности микроорганизмов сразу по несколькимнезависимым показателям (таким как интенсивностьсветорассеяния, рН и электропроводность тестовойсреды), а не только по одному (мутности тестовойсреды, числу колоний микроорганизмов или величинезоны задержки их роста), как в случае применениястандартных методик. Кроме того, представленнаяметодика менее материалоемка и трудоемка, посравнению с аналогичными стандартными методами,а также дает гораздо больше возможностей дляавтоматизации всего процесса анализа.Все это делает представленную методикудоступной для массового применения, чем ранееиспользуемые стандартные методы микробиоло-гического тестирования и оценки микробиологи-ческой контаминированности образцов различнойпродукции. Последнее же является весьмаактуальным в свете того, что одним из важныхусловий обеспечения должного уровня безопасностии качества жизни людей является не толькосвоевременное и качественное тестирование про- иантибиотических свойств новой пищевой и инойпродукции, а также отдельных ингредиентов идобавок к ней, но и постоянный широкий мониторингпро- и антибиотических свойств уже допущеннойк массовому употреблению продукции с цельювыявления недоброкачественных либо успевшихдо окончательной реализации испортиться илипретерпеть химическое или биологическое заражениеее образцов.В отношении исследованных растительныхэкстрактов следует отметить следующее. Из разныхчастей растений различными способами можноэкстрагировать БАВ. С изменением концентрацийэфирных масел может меняться характер ихбиологической активности. Среди исследованныхэфирных масел наиболее активные долгосрочныеантибиотические свойства проявили экстракты излистьев туи западной, эвкалипта шаровидного икипариса вечнозеленого.Краткосрочная биологическая активностьэфирных масел в большинстве случаев была большеих долгосрочной активности. А среднесрочнаябиологическая активность эфирных масел былапромежуточной по величине и лишь иногдапревышала не только долгосрочную, но и ихкраткосрочную биологическую активность. Приэтом с уменьшением концентраций эфирных маселв тестовой среде их антибиотическая активностьмонотонно уменьшалась.Очевидно, что характер про- и антибиотическойактивности пищевой и иной продукции, в томчисле включающей различные эфирные масла,в значительной степени определяется выборомне только сырья и способа экстрагирования изнего БАВ, но и концентрацией действующихвеществ в продукции. Причем точный характерэтих зависимостей может быть установлен лишьэмпирически, т. е. с помощью значительного числатестовых испытаний (которые удобно проводитьпредставленной в этой работе методикой).Критерии авторстваВ. С. Сибирцев руководил проектом. У. Ю. Нечи-поренко, В. Л. Кабанов и М. Ю. Кукин участвовалив проведении экспериментов и обсуждении ихрезультатов.Конфликт интересовАвторы заявляют об отсутствии конфликтаинтересов.ContributionV.S. Sibirtsev supervised the project, whileU.Yu. Nechiporenko, V.L. Kabanov, and M.Yu. Kukinperformed the experimental work and assessed theobtained results.Conflict of interestThe authors declare that there is no conflict of interestregarding the publication of this article.</p>
 </body>
 <back>
  <ref-list>
   <ref id="B1">
    <label>1.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">In vitro effects of food extracts on selected probiotic and pathogenic bacteria / J. Sutherland, M. Miles, D. Hedderley [et al.] // International Journal of Food Sciences and Nutrition. - 2009. - Vol. 60, № 8. - Р. 717-727. https://doi.org/10.3109/09637480802165650.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sutherland J, Miles M, Hedderley D, Li J, Devoy S, Sutton K, et al. In vitro effects of food extracts on selected probiotic and pathogenic bacteria. International Journal of Food Sciences and Nutrition. 2009;60(8):717-727. https://doi.org/10.3109/09637480802165650.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B2">
    <label>2.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Das, S. Synergistic or additive antimicrobial activities of Indian spice and herbal extracts against pathogenic, probiotic and food-spoiler micro-organisms / S. Das, C. Anjeza, S. Mandal // International Food Research Journal. - 2012. - Vol. 19, № 3. - Р. 1185-1191.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Das S, Anjeza C, Mandal S. Synergistic or additive antimicrobial activities of Indian spice and herbal extracts against pathogenic, probiotic and food-spoiler micro-organisms. International Food Research Journal. 2012;19(3):1185-1191.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B3">
    <label>3.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Al-Zubairi, A. S. The antibacterial, antifungal, and antioxidant activities of essential oil from different aromatic plants / A. S. Al-Zubairi, M. A. Al-Mamary, E. Al-Ghasani // Global Advanced Research Journal of Medicine and Medical Sciences. - 2017. - Vol. 6, № 9. - Р. 224-233.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Al-Zubairi AS, Al-Mamary MA, Al-Ghasani E. The antibacterial, antifungal, and antioxidant activities of essential oil from different aromatic plants. Global Advanced Research Journal of Medicine and Medical Sciences. 2017;6(9):224-233.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B4">
    <label>4.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Zhuravlev, O. E. Synthesis and antimicrobial activity of n-decylpyridinium salts with inorganic anions / O. E. Zhuravlev, L. I. Voronchikhina // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2018. - Vol. 52, № 4. - P. 312-315. https://doi.org/10.1007/s11094-018-1813-6.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Zhuravlev OE, Voronchikhina LI. Synthesis and antimicrobial activity of n-decylpyridinium salts with inorganic anions. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2018;52(4):312-315. https://doi.org/10.1007/s11094-018-1813-6.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B5">
    <label>5.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Synthesis and antimicrobial activity of 5-(arylmethylidene)-2,4,6-pyrimidine-2,4,6(1H,3H,5H)-triones / S. A. Luzhnova, A. G. Tyrkov, N. M. Gabitova [et al.] // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2018. - Vol. 52, № 6. - P. 506-509. https://doi.org/10.1007/s11094-018-1849-7.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Luzhnova SA, Tyrkov AG, Gabitova NM, Yurtaeva EA. Synthesis and antimicrobial activity of 5-(arylmethylidene)-2,4,6-pyrimidine-2,4,6(1H,3H,5H)-triones. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2018;52(6):506-509. https://doi.org/10.1007/s11094-018-1849-7.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B6">
    <label>6.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Rodino, S. Herbal extracts - new trends in functional and medicinal beverages / S. Rodino, M. Butu // Functional and medicinal beverages. Volume 11: The science of beverages / A. M. Grumezescu, A. M. Holban. - Academic Press, 2019. - P. 73-108. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-816397-9.00003-0.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Rodino S, Butu M. Herbal extracts - new trends in functional and medicinal beverages. In: Grumezescu AM, Holban AM, editors. Functional and medicinal beverages. Volume 11: The science of beverages. Academic Press; 2019. pp. 73-108. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-816397-9.00003-0.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B7">
    <label>7.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Burt, S. Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in foods - a review / S. Burt // International Journal of Food Microbiology. - 2004. - Vol. 94, № 3. - P. 223-253. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2004.03.022.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Burt S. Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in foods - a review. International Journal of Food Microbiology. 2004;94(3):223-253. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2004.03.022.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B8">
    <label>8.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Biological effects of essential oils - A review / F. Bakkali, S. Averbeck, D. Averbeck [et al.] // Food and Chemical Toxicology. - 2008. - Vol. 46, № 2. - Р. 446-475. https://doi.org/10.1016/j.fct.2007.09.106.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Bakkali F, Averbeck S, Averbeck D, Waomar M. Biological effects of essential oils - A review. Food and Chemical Toxicology. 2008;46(2):446-475. https://doi.org/10.1016/j.fct.2007.09.106.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B9">
    <label>9.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Herbal antidiabetics: A review / A. K. Tripathi, P. K. Bhoyar, J. R. Baheti [et al.] // International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences. - 2011. - Vol. 2, № 1. - Р. 30-37.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Tripathi AK, Bhoyar PK, Baheti JR, Biyani DM, Khalique M, Kothmire MS, et al. Herbal antidiabetics: A review. International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences. 2011;2(1):30-37.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B10">
    <label>10.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Benefits of herbal extracts in cosmetics: a review / A. Fatima, S. Alok, P. Agarwal [et al.] // International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research. - 2013. - Vol. 4, № 10. - Р. 3746-3760. https://doi.org/10.13040/ijpsr.0975-8232.4(10).3746-60.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Fatima A, Alok S, Agarwal P, Singh PP, Verma A. Benefits of herbal extracts in cosmetics: a review. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research. 2013;4(10):3746-3760. https://doi.org/10.13040/ijpsr.0975-8232.4(10).3746-60.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B11">
    <label>11.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Herbal antioxidant in clinical practice: a review / S. Alok, S. K. Jain, A. Verma [et al.] // Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. - 2014. - Vol. 4, № 1. - P. 78-84. https://doi.org/10.1016/S2221-1691(14)60213-6.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Alok S, Jain SK, Verma A, Kumar M, Mahor A, Sabharwal M. Herbal antioxidant in clinical practice: a review. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2014;4(1):78-84. https://doi.org/10.1016/S2221-1691(14)60213-6.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B12">
    <label>12.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Donsì, F. Essential oil nanoemulsions as antimicrobial agents in food / F. Donsì, G. Ferrari // Journal of Biotechnology. - 2016. - Vol. 233. - P. 106-120. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.07.005.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Donsì F, Ferrari G. Essential oil nanoemulsions as antimicrobial agents in food. Journal of Biotechnology. 2016;233:106-120. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.07.005.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B13">
    <label>13.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Herbal extracts, lichens and biomolecules as natural photo-protection alternatives to synthetic UV filters. A systematic review / M. Radice, S. Manfredini, P. Ziosi [et al.] // Fitoterapia. - 2016. - Vol. 114. - Р. 144-162. https://doi.org/10.1016/j.fitote.2016.09.003.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Radice M, Manfredini S, Ziosi P, Dissette V, Buso P, Fallacara A, et al. Herbal extracts, lichens and biomolecules as natural photo-protection alternatives to synthetic UV filters. A systematic review. Fitoterapia. 2016;114:144-162. https://doi.org/10.1016/j.fitote.2016.09.003.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B14">
    <label>14.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Antibacterial and antibiofilm activities of Laurus nobilis L. essential oil against Staphylococcus aureus strains associated with oral infections / A. Merghni, H. Marzouki, H. Hentati [et al.] // Current Research in Translational Medicine. - 2016. - Vol. 64, № 1. - Р. 29-34. https://doi.org/10.1016/j.patbio.2015.10.003.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Merghni A, Marzouki H, Hentati H, Aouni M, Mastouri M. Antibacterial and antibiofilm activities of Laurus nobilis L. essential oil against Staphylococcus aureus strains associated with oral infections. Current Research in Translational Medicine. 2016;64(1):29-34. https://doi.org/10.1016/j.patbio.2015.10.003.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B15">
    <label>15.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Fani, M. In vitro antimicrobial activity of Thymus vulgaris essential oil against major oral pathogens / M. Fani, J. Kohanteb // Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. - 2017. - Vol. 22, № 4. - Р. 660-666. https://doi.org/10.1177/2156587217700772.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Fani M, Kohanteb J. In vitro antimicrobial activity of Thymus vulgaris essential oil against major oral pathogens. Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 2017;22(4):660-666. https://doi.org/10.1177/2156587217700772.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B16">
    <label>16.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Influence of Pleurotus ostreatus β-glucans on the growth and activity of certain lactic acid bacteria / M. S. Kokina, M. Frioui, M. M. Shamtsyan [et al.] // Scientific Study and Research: Chemistry and Chemical Engineering, Biotechnology, Food Industry. - 2018. - Vol. 19, № 4. - Р. 465-471.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Kokina MS, Frioui M, Shamtsyan MM, Sibirtsev VS, Krasnikova LV, Konusova VG, et al. Influence of Pleurotus ostreatus β-glucans on the growth and activity of certain lactic acid bacteria. Scientific Study and Research: Chemistry and Chemical Engineering, Biotechnology, Food Industry. 2018;19(4):465-471.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B17">
    <label>17.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Atarés, L. Essential oils as additives in biodegradable films and coatings for active food packaging / L. Atarés, A. Chiralt // Trends in Food Science and Technology. - 2016. - Vol. 48. - P. 51-62. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2015.12.001.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Atarés L, Chiralt A. Essential oils as additives in biodegradable films and coatings for active food packaging. Trends in Food Science and Technology. 2016;48:51-62. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2015.12.001.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B18">
    <label>18.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Use of essential oils in active food packaging: Recent advances and future trends / R. Ribeiro-Santos, M. Andrade, N. R. de Melo [et al.] // Trends in Food Science and Technology. - 2017. - Vol. 61. - P. 132-140. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2016.11.021.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Ribeiro-Santos R, Andrade M, de Melo NR, Sanches-Silva A. Use of essential oils in active food packaging: Recent advances and future trends. Trends in Food Science and Technology. 2017;61:132-140. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2016.11.021.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B19">
    <label>19.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Application of edible coating with essential oil in food preservation / J. Ju, Y. Xie, Y. Guo [et al.] // Critical Reviews in Food Science and Nutrition. - 2019. - Vol. 59, № 15. - P. 2467-2480. https://doi.org/10.1080/10408398.2018.1456402.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Ju J, Xie Y, Guo Y, Cheng Y, Qian H, Yao W. Application of edible coating with essential oil in food preservation. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 2019;59(15):2467-2480. https://doi.org/10.1080/10408398.2018.1456402.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B20">
    <label>20.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Yuan, G. Chitosan films and coatings containing essential oils: The antioxidant and antimicrobial activity, and application in food systems / G. Yuan, X. Chen, D. Li // Food Research International. - 2016. - Vol. 89. - P. 117-128. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2016.10.004.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Yuan G, Chen X, Li D. Chitosan films and coatings containing essential oils: The antioxidant and antimicrobial activity, and application in food systems. Food Research International. 2016;89:117-128. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2016.10.004.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B21">
    <label>21.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Pavela, R. Essential oils as ecofriendly biopesticides? Challenges and constraints / R. Pavela, G. Benelli // Trends in Plant Science. - 2016. - Vol. 21, № 12. - Р. 1000-1007. https://doi.org/10.1016/j.tplants.2016.10.005.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Pavela R, Benelli G. Essential oils as ecofriendly biopesticides? Challenges and constraints. Trends in Plant Science. 2016;21(12):1000-1007. https://doi.org/10.1016/j.tplants.2016.10.005.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B22">
    <label>22.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Leukopenia prognosis by radiation therapy of patients with Hodgkin’s disease / S. D. Ivanov, L. I. Korytova, V. A. Yamshanov [et al.] // Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. - 1997. - Vol. 16, № 2. - P. 183-188.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Ivanov SD, Korytova LI, Yamshanov VA, Ilyn NV, Sibirtsev VS. Leukopenia prognosis by radiation therapy of patients with Hodgkin’s disease. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 1997;16(2):183-188.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B23">
    <label>23.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Sibirtsev, V. S. Fluorescent DNA probes: study of mechanisms of changes in spectral properties and features of practical application / V. S. Sibirtsev // Biochemistry (Moscow). - 2007. - Vol. 72, № 8. - P. 887-900. https://doi.org/10.1134/S0006297907080111.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sibirtsev VS. Fluorescent DNA probes: study of mechanisms of changes in spectral properties and features of practical application. Biochemistry (Moscow). 2007;72(8):887-900. https://doi.org/10.1134/S0006297907080111.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B24">
    <label>24.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Use of impedance biotesting to assess the actions of pharmaceutical compounds on the growth of microorganisms / V. S. Sibirtsev, I. A. Naumov, E. E. Kuprina [et al.] // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2016. - Vol. 50, № 7. - P. 481-485. https://doi.org/10.1007/s11094-016-1473-3.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sibirtsev VS, Naumov IA, Kuprina EE, Olekhnovich RO. Use of impedance biotesting to assess the actions of pharmaceutical compounds on the growth of microorganisms. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2016;50(7):481-485. https://doi.org/10.1007/s11094-016-1473-3.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B25">
    <label>25.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Sibirtsev, V. S. Biological test methods based on fluorometric genome analysis / V. S. Sibirtsev // Journal of Optical Technology. - 2017. - Vol. 84, № 11. - P. 787-791. https://doi.org/10.1364/JOT.84.000787.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sibirtsev VS. Biological test methods based on fluorometric genome analysis. Journal of Optical Technology. 2017;84(11):787-791. https://doi.org/10.1364/JOT.84.000787.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B26">
    <label>26.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Комплексная методика инструментального микробиотестирования экологической безопасности различной продукции, отходов и территорий / В. С. Сибирцев, М. В. Успенская, А. В. Гарабаджиу [и др.] // Доклады академии наук. - 2019. - Т. 485, № 6. - С. 760-763. https://doi.org/10.31857/S0869-56524856760-763.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sibirtsev VS, Uspenskaya MV, Garabadgiu AV, Shvets VI. An integrated method of instrumental microbiotesting of environmental safety of various products, wastes, and territories. Doklady Akademii Nauk. 2019;485(6):760-763. (In Russ.). https://doi.org/10.31857/S0869-56524856760-763.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B27">
    <label>27.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Sibirtsev, V. S. New method of integrated photofluorescence microbiotesting / V. S. Sibirtsev, A. V. Garabadgiu, V. I. Shvets // Doklady Biological Sciences. - 2019. - Vol. 489, № 1. - Р. 196-199. https://doi.org/10.1134/S0012496619060103.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Sibirtsev VS, Garabadgiu AV, Shvets VI. New method of integrated photofluorescence microbiotesting. Doklady Biological Sciences. 2019;489(1):196-199. https://doi.org/10.1134/S0012496619060103.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B28">
    <label>28.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Korn, G. A. Mathematical handbook for scientists and engineers. Definitions, theorems and formulas for reference and review / G. A. Korn, T. Korn. - New York : McGraw-Hill, 1968. - 1150 p.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Korn GA, Korn T. Mathematical handbook for scientists and engineers. Definitions, theorems and formulas for reference and review. New York: McGraw-Hill; 1968. 1150 p.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
   <ref id="B29">
    <label>29.</label>
    <citation-alternatives>
     <mixed-citation xml:lang="ru">Johnson, K. J. Numerical Methods in Chemistry / K. J. Johnson. - New York : Dekker, 1980. - 503 p.</mixed-citation>
     <mixed-citation xml:lang="en">Johnson KJ. Numerical Methods in Chemistry. New York: Dekker; 1980. 503 p.</mixed-citation>
    </citation-alternatives>
   </ref>
  </ref-list>
 </back>
</article>
